ELISA的原理及方法？

原理：ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性，酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性，又保留酶的活性。在测定时，受检标本(测定其中的抗体或抗原)与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。再加入酶标记的抗原或抗体，也通过反应而结合在固相载体上。此时固相.上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，间接地放大了免疫反应的结果，使测定方法达到很高的敏感度。

方法：双抗体夹心法测抗原，双抗体夹心法测抗体，竞争法测抗原，竞争法测抗体，捕获包被法测抗体，ABS-ELISA

ELISA是酶免疫测定技术中应用最广的技术。是利用抗原或抗体可非特异吸附于聚苯乙烯等固相载体表面的特性，使抗原抗体反应在固相载体表面进行，通过酶标记抗体对酶底物的显色反应，进行定性、定量的一种免疫学检测法。常用方法有：

1)双抗体夹心法：用于检查特异抗原。用已知抗体包被，检测未知可溶性抗原，酶标记的抗体和包被抗体是识别同一种抗原上的不同抗原决定基的两种抗体。

2)间接法：用于检查特异抗体。用已知可溶性抗原包被，检测未知抗体，酶标记的抗体是二抗。

3)BAS-E1ASA：在生物素一亲和素系统中利用生物素一亲和素一酶的连接关系，追踪生物素标记的抗原或抗体，通过酶催化底物显色，可检测相应抗体或抗原。

4)ELISPOT：用已知细胞因子的抗体包被固相，加入待检效应细胞，温育一定时间后洗去细胞，如温育过程中有相应的细胞因子产生，加酶标抗体及底物后则显色。

下面是ELISA的原理和方法的简要描述：

原理：

1. 将待检样品加入微孔板（通常是96孔板），在孔中与固相（如酶标板上的抗体或抗原）相互作用。

2. 清洗孔中的非特异性结合物质。

3. 加入与待检分子特异性结合的次级抗体（例如，与待检抗原结合的抗体）。

4. 清洗孔中的非特异性结合物质。

5. 加入酶标记的三抗，如辣根过氧化物酶（HRP）结合的抗辣根过氧化物酶（HRP）抗体。

6. 清洗孔中的非特异性结合物质。

7. 加入底物，使酶催化反应产生可测量的信号。

8. 通过光学密度测量（如吸光度测量）或荧光读数仪测量信号的强度，根据标准曲线确定待检分子的浓度。

方法：

1. 准备样品：收集待检样品（血清、细胞上清等），必要时进行稀释。

2. 处理酶标板：将特定的抗体或抗原涂覆在微孔板上，使其与待检分子发生特异性结合。

3. 加入样品：将样品加入微孔板孔中，使其中的待检分子与固相结合。

4. 清洗：洗涤孔中的非特异性结合物质，以减少背景干扰。

5. 加入次级抗体：加入与待检分子结合的次级抗体，以扩大信号。

6. 清洗：再次洗涤孔中的非特异性结合物质。

7. 加入酶标记的三抗：加入带有酶标记的三抗，如HRP结合的抗体。

8. 清洗：再次洗涤孔中的非特异性结合物质。

9. 底物反应：加入适当的底物，使酶催化反应发生并产生可测量的信号。

10. 读取结果：通过光学密度测量或荧光读数仪测量信号的强度，并根据标准曲线确定待检分子的浓度。