汤姆卜丽波
组织透明化方法主要分为三类:有机溶剂型、水溶剂型、水凝胶型,需要快速出结果一般选有机
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1. 油性组织透明化方法
油性组织透明化技术主要是应用含有高折射率介质的光学透明剂取代组织中水分和脂质来平衡组织折射率,使组织达到光学透明。油性组织透明化方法具有较强的透明化效果,但是组织中的荧光蛋白容易被破坏,信号保存度低。
2. 水性组织透明化方法
亲水性试剂透明主要包括:单纯浸泡透明和高水化脱脂透明。
浸泡型透明化技术是将样品浸泡在高折射率溶液中利用渗透压使组织逐渐透明化,该方法不去除脂质,利用高折射率溶液替换组织内外的液体,以平衡折射率,浸泡型透明化方法常适用于较小样本的透明化处理。ClearT是基于甲酰胺的浸泡型透明化方法,该方法透明速度快,成像效果好,但会使组织略微膨胀,且会使样本荧光信号淬灭。PEG可以稳定蛋白质构象,继而发展了可保留荧光蛋白的ClearT2的透明化技术,但该方法透明度比clearT低,透明化能力受限。SeeDB技术以果糖和硫代甘油为主要成分。能在几天内将样本透明化,且体积变化小,并可以与亲脂性染料兼容。但该方法因果糖黏度大导致在组织内的渗透性较低。由于SeeDB黏度极高,在SeeDB基础上衍生了FRUIT透明化方法,该方法选择尿素作为试剂中另一成分,降低了果糖黏度,大大提高试剂流动性和渗透性,加速了试剂在组织中的扩散速率。虽然浸泡型透明化操作比较简单方便,但浸泡型透明化方法不能去除脂质,因此通过该方法处理的样本透明度有限。
3. 水凝胶组织透明化方法
去垢剂可以高效的去除样本中的脂类物质,但是高浓度的去垢剂处理样本可能会使样本发生形变。通过将样本包埋在水凝胶中,使水凝胶与样本中的蛋白质和核酸分子形成共价连接便可固定和保护细胞结构,再将样本置于透明化试剂中即可避免样本发生这种形变。CLARITY透明化方法利用凝胶包埋样本,并利用电场力去除样本的脂质从而使样本快速透明。SHIELD透明化方法通过环氧化合物P3PE固定组织实现蛋白的保护,之后使用SDS进行被动或主动除脂。
油性透明化方法透明的样本透明度高,速度快,能适用于多种组织和器官。但是油性方法所使用的试剂大多毒性较强,并且容易淬灭内源性荧光蛋白的信号,不能和细胞膜上亲脂染料相兼容,样本会有明显收缩,组织或器官内部精确三维结构丢失。水性透明化方法虽然可以部分解决荧光蛋白易淬灭的问题,但是也存在透明时间长,透明能力低的缺点。水凝胶透明化方法操作过程复杂,且需要一定的设备。
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主要看组织的类型
目前组织透明化方法有油性,基于水凝胶和水性的组织透明化方法。可依靠组织的类型进行选择,脂肪类组织多选择油性,单细胞可选择水性等
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