在反转录制备cDNA的第一阶段，加入引物和模板RNA以后，需要65°℃变性处理5分钟，有什么作用？为什么？

主要是为了打开RNA中的二级结构，产物引物于模版结合

可以去除退火过程中形成的干扰条带

主要有以下作用：

使RNA变性：高温可以使RNA分子的二级结构变性，使其变成单链结构，这可以有助于引物结合于RNA模板的3'端。

促进引物与RNA模板的结合：引物通常结合于RNA模板的3'端，而高温能够使引物与RNA模板更紧密地结合在一起。

降低反应中的二级结构和自聚合：许多RNA分子具有复杂的二级结构和自聚合的倾向，这些结构和自聚合可以影响引物的结合和反转录酶的活性。高温变性可以打破这些结构和自聚合，从而提高反应的效率和准确性。