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我的组织就是肝组织,含有很多内源性的生物素,由于亲和素会与生物体内的内源性生物素反应,从而有非特异性着色,如何解决?

相关实验:免疫组化

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毛利小五郎的徒弟

我的组织就是肝组织,含有很多内源性的生物素,由于亲和素会与生物体内的内源性生物素反应,从而有非特异性着色,如何解决?

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2 个回答

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sswei

有帮助

封闭内源性生物素:将组织切片用0.0l%亲和素溶液室温处理10~20分钟,使其结合位点饱和,以消除内源性生物素的活性。也可购买生物素阻断剂试剂盒,其中A液为亲和素.B液为生物素。使用时加A液l滴,室温10分钟,PBS冲洗3次,每次2分钟;加B液1滴。室温10分钟.PBS冲洗3次,每次2分钟。

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loveliufudan

有帮助

在肝组织中存在大量的内源性生物素可能会干扰亲和素着色的特异性。您可以尝试以下几种方法来解决这个问题:

预处理组织样品:在进行亲和素着色前,可以对肝组织样品进行预处理,例如使用胺或醇溶液来破坏内源性生物素。这样可以减少内源性生物素的干扰,提高亲和素着色的特异性。

使用抗生素:将抗生素添加到亲和素染色液中,可以抑制内源性生物素的影响。例如,可以添加一种名为avidin的蛋白酶抑制剂,它可以与生物素结合并防止非特异性着色。

利用竞争性抑制:竞争性抑制是另一种减少内源性生物素干扰的方法。在亲和素染色前,可以将生物素加入到样品中,使其与亲和素竞争结合,从而减少非特异性着色。

总之,在进行亲和素着色时,应该充分考虑组织样品中内源性生物素的影响,并根据实验需要选择合适的方法来降低干扰,提高着色的特异性。

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