灭活内源性酶及封闭内源性生物素

灭活内源性酶及封闭内源性生物素

如采用过氧化物酶检测系统或碱性磷酸酶和NBT/BCIP显色系统进行免疫组织化学染色时．酶的作用是催化底物，使显色剂显色，而组织中的内源性酶同样也能催化底物，使其显色，这就影响免疫组织化学染色的特异性。在使用亲和素试剂的免疫组织化学染色中，内源性生物素易结合亲和素，形成亲和素一生物素复合物，导致假阳性。所以在染色之前应设法将组织内的内源性酶灭活或将内源性生物素封闭，以保证染色的特异性。

(1)灭活内源性过氧化物酶：将组织在3％甲醇―H2 O2 (3ml纯甲醇中加入30％H2 02 0．3ml，现用现配)中室温浸泡10分钟，继而用PBS冲洗3次，每次5分钟。

(2)灭活碱性磷酸酶：最常用的方法是将左旋咪唑(以每毫升加24mg)加入底物液中并保持pH为7．6～8．2，可除去大部分内源性碱性磷酸酶，对于仍能干扰染色的酸性磷酸酶可用0．05mol/L酒石酸抑制。