免疫荧光实验问题求助？

你的这个情况建议最好还是重新做为好。

不可以。淬灭后荧光物质不再发光不可以恢复。就是拥有自由摆动的潜在发光基团因聚集而摆动受阻便发射荧光；而在常态发光荧光的基团进一步聚集后便不再发光。

荧光萃灭了但它还是跟抗原结合在一起，它又不能像wb那样stripping掉再孵育一次。

如果细胞免疫荧光照片曝光时间太长导致荧光淬灭，通常可以尝试重新敷二抗来增强荧光信号，但要根据实际情况来决定是否必须要重做。以下是一些注意事项：

确认荧光是否完全消失。在照片上确认荧光是否已完全消失或仅是减弱了。如果荧光完全消失，那么重新敷二抗也不会产生荧光信号。如果仅是减弱了，则重新敷二抗可能有助于恢复荧光信号。

重新敷二抗的浓度。在重新敷二抗之前，需要调整二抗的浓度以确保其能够有效地结合到目标抗原上。如果浓度过高，则可能会产生背景荧光；如果浓度过低，则可能无法增强荧光信号。

重新敷二抗的时间。重新敷二抗的时间也需要进行优化。如果时间太短，则可能无法充分结合目标抗原；如果时间太长，则可能会产生背景荧光。

考虑使用不同二抗或探针。如果重新敷二抗后仍无法恢复荧光信号，则可能需要考虑使用不同的二抗或探针，或者采用其他的免疫染色方法。

总之，根据实际情况来决定是否需要重做。如果荧光完全消失或重新敷二抗无法恢复荧光信号，则可能需要重做。