如何分离外周血NK细胞和单核细胞

目前主要的分离方法是Ficoll-hypaque（葡聚糖－泛影葡胺）密度梯度离心法，因为血液中各有形成分的比重存在差异最多12天，但需要刺激。

分离外周血NK细胞和单核细胞的常用方法有以下几种：

密度梯度离心分离法：该方法是将外周血样品加到密度梯度液上，经离心后不同密度的细胞在不同的位置上，从而实现不同细胞种类的分离。常用的密度梯度液有Ficoll、Percoll等。NK细胞和单核细胞的密度不同，可以通过调整离心速度和时间来分离。

免疫磁珠法：该方法是通过将抗体与磁珠结合，将抗体特异性识别的细胞分离出来。可以使用CD56抗体磁珠分离出NK细胞，使用CD14抗体磁珠分离出单核细胞。

贴壁法：该方法是将外周血样品加入到预先涂有特定的细胞贴壁剂的培养皿中，NK细胞和单核细胞具有不同的贴附性，可以通过不同时间的贴壁来分离。NK细胞具有较弱的贴壁性，可在贴壁培养2小时后用PBS洗涤去除非粘附细胞，得到NK细胞。而单核细胞具有较强的贴壁性，可在培养皿中贴壁培养数小时后，用PBS洗涤去除非粘附细胞，得到单核细胞。

以上是常用的分离外周血NK细胞和单核细胞的方法，您可以根据实验要求和实验室设备条件选择适合的方法进行分离。需要注意的是，在进行实验前需要了解和遵守相关的生物安全操作规范，保障实验人员和样品的安全。

Ficoll分离液 (2份6%聚蔗糖蒸馏水溶液与1份34%泛影葡胺生理盐水溶液混合)为常规的淋巴细胞分离液，其比重为1.077 ±0.002，主要用于分离外周血中单个核细胞。密度梯度离心后其分布由上到下依次为：稀释的血浆层、单个核细胞层、粒细胞层和红细胞层。

从外周血分离到PBMC后，后续使用磁珠细胞分选NK细胞。

外周血单个核细胞(PBMC)的分离主要有两种方法，即聚蔗糖 -泛影葡胺(Ficol l-Hypaque) 分离法和聚乙烯吡咯烷酮硅胶(P e rco l l)分离法。