单核细胞分离
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铁粉吸附法
<font>1</font> .材料及试剂
( <font>1</font> )铁粉或羰基铁粉( <font>Atomergic chemetals</font> ) <font>99</font> %的纯度,颗粒小于 <font>60</font> µm (Goodfellow Metals )。
( <font>2</font> )强磁铁(马蹄形)。
( <font>3</font> )一块小棒状磁铁(约 <chmetcnv><span><font>1cm</font> </span> </chmetcnv> 长)。
( <font>4</font> )毛细吸管等。
<font>2</font> .操作方法
( <font>1</font> )称取一定量的铁粉,一般为 <chmetcnv><span><font>10g</font> </span> </chmetcnv> ,用 <font>100ml</font> 生理盐水洗涤 <font>4</font> 次,去除任何可溶性有毒物质。在倒去盐水时,用强磁铁吸住铁粉。
( <font>2</font> )用 <font>50ml</font> 生理盐水混悬铁粉。摇匀后,分装于 <font>10</font> 个瓶中,包扎瓶口, <chmetcnv><span><font>121</font> </span> <span>℃</span> </chmetcnv> 灭菌 <font>20min</font> ,拿出后立即轻轻摇匀,防止铁粉结块,储藏备用。
( <font>3</font> )临用前,倒去瓶中的生理盐水,加入适量的单个核细胞悬液( <font>3ml</font> ~ <font>5ml</font> ,细胞总数为 <font>8</font> × <font>10<sup>7</sup> </font> 个/瓶)。 <chmetcnv><span><font>37</font> </span> <span>℃</span> </chmetcnv> 温育 <font>45min</font> ,中间不时晃动,使铁粉悬浮起来。
( <font>4</font> )加入一块小磁铁棒于瓶中,让其吸住铁粉以及附着在铁粉上的细胞。
( <font>5</font> )倒出悬液,此悬液主要是淋巴细胞,离心,收集。
( <font>6</font> )在铁粉瓶内倒入一定量的 <font>Hank’s</font> 液,用力振摇后,以强磁铁吸附,几分钟后,倒出液体。
( <font>7</font> ) <font>2 000r/min</font> 离心液体,管底即为单核细胞。
玻璃板吸附法
将分离的单个核细胞倾于无菌洁净的玻璃平皿内,置 <chmetcnv><span><font>37</font> </span> <span>℃</span> </chmetcnv> <font> 30 min</font> ~ <font>40min</font> ,用毛细吸管轻轻吸取悬液,即为淋巴细胞。用适量的 <font>Hank’s</font> 液冲洗平皿,收获即为单核细胞悬液。