单核细胞分离

铁粉吸附法

 

1 ．材料及试剂

（ 1 ）铁粉或羰基铁粉（ Atomergic chemetals ） 99 ％的纯度，颗粒小于 60 µm （Goodfellow Metals ）。

 

（ 2 ）强磁铁（马蹄形）。

（ 3 ）一块小棒状磁铁（约 1cm 长）。

（ 4 ）毛细吸管等。

2 ．操作方法

（ 1 ）称取一定量的铁粉，一般为 10g ，用 100ml 生理盐水洗涤 4 次，去除任何可溶性有毒物质。在倒去盐水时，用强磁铁吸住铁粉。

（ 2 ）用 50ml 生理盐水混悬铁粉。摇匀后，分装于 10 个瓶中，包扎瓶口， 121 ℃ 灭菌 20min ，拿出后立即轻轻摇匀，防止铁粉结块，储藏备用。

（ 3 ）临用前，倒去瓶中的生理盐水，加入适量的单个核细胞悬液（ 3ml ～ 5ml ，细胞总数为 8 × 10⁷ 个／瓶）。 37 ℃ 温育 45min ，中间不时晃动，使铁粉悬浮起来。

（ 4 ）加入一块小磁铁棒于瓶中，让其吸住铁粉以及附着在铁粉上的细胞。

（ 5 ）倒出悬液，此悬液主要是淋巴细胞，离心，收集。

（ 6 ）在铁粉瓶内倒入一定量的 Hank’s 液，用力振摇后，以强磁铁吸附，几分钟后，倒出液体。

（ 7 ） 2 000r/min 离心液体，管底即为单核细胞。

 

 

 

玻璃板吸附法

 

将分离的单个核细胞倾于无菌洁净的玻璃平皿内，置 37 ℃ 30 min ～ 40min ，用毛细吸管轻轻吸取悬液，即为淋巴细胞。用适量的 Hank’s 液冲洗平皿，收获即为单核细胞悬液。