关于T细胞

1、测Treg的时候不需要刺激，CD4+CD25+在细胞膜上，FOXP3+细胞内的转录因子，都是固有表达的蛋白，而IL-17是本身表达的都分泌都细胞外了，所有需要刺激、阻断剂、固定剂、破膜剂等，具体步骤应该你有了。

2、一般刺激剂需要用培养基稀释到母液浓度（一般为工作浓度的500倍到1000倍）后分装，然后刺激的时候直接加到培养基中；

PMA

贮存液：PMA 溶于DMSO，浓度为0.1mg/ml，-20℃保存

工作液：贮存液1:100 稀释于RPMI 1640(不含小牛血清-FBS)或PBS(无菌，无NaN3)中，此时为1μg/ml

工作浓度：25ng/ml

细胞培养：每100μl 反应体系加工作液2.5μl 工作液

Ionomycin

贮存液：Ionomycin 溶于DMSO，浓度为1mg/ml，-20℃保存

工作液：贮存液1:20 稀释于RPMI 1640(不含小牛血清-FBS)或PBS(无菌，无NaN3)中，此时为50μg/ml

工作浓度：1μg/ml

细胞培养：每100μl 反应体系加工作液2μl 工作液

3、PMA和Ionomycin是非特异性的激活T细胞，而cd3 和cd28抗体是通过与T细胞表面的CD3/CD28结合后来达到激活T细胞的效果，但需要注意的是，不是所有CD3和CD28抗体都具有活化T细胞的功能，需要仔细看清说明书。