求助人Th17细胞的诱导
做实验的小可爱
我分离出CD4+T细胞，加了细胞因子IL6, TGFβ1，IL23, IL1β，anti-IFNr, anti-IL2，anti-IL4，诱导4天，一直诱导不成功，求助各位，有没有任何改进的方法？我已经延长时间至六天，依然没有诱导出来。求助有没有做相同实验的老师指导一下😭
2 个回答
huarenqiang5
1、建议用Th1/Th2/Treg/Th17体外诱导分化，对于48孔板，每孔加入0.5ml细胞悬液（即0.5×10E6细胞）。对于24孔板，每孔加入1ml细胞悬液（即1×10E6细胞）。
2、如果测试诸如药物之类的因素的影响，则根据实验，在分化过程之前，期间或之后将测试物质添加到相应的孔中。接下来，在培养基中加入相应量的细胞因子进行诱导。Th0：30U/ml hIL-2。Th1：15ng/ml rmIL-12、30U/ml hIL-2、5000ng/ml IL-4（克隆号11B11）。Th2：10ng/ml rmIL-4、30U/ml hIL-2、2000ng/ml可溶性CD28（克隆号37.51）、5000ng/ml IFN-g（克隆号XMG1.2）。iTreg：15ng /ml hTGFβ、30U/ml hIL-2、5000ng/ml IFN-g（克隆号XMG1.2）、5000ng/mlIL-4（克隆号11B11）。Th17：20ng/ml rmIL-6、3ng/ml hTGFβ、5000ng/ml IFN-g（克隆号XMG1.2）、5000ng/mlIL-4（克隆号11B11）。
做实验的小可爱
谢谢老师的回答，基于此，我要请教您几个问题。
1.请问您一般要诱导几天以后去用流式检测呢？
2.细胞因子和相应的抗体是一起加进去吗？还是要前几天加哪几种？过几天再加哪几种呢？
感谢您的回答，感激不尽
毛利小五郎的徒弟
给予CD3及CD28抗体刺激后在培养体系中加入白细胞介素6及转化生长因子β,试一下。
