流式分选仪补偿怎么调整

遵循以下原则:①多色实验（超过单色）时，所有荧光染料都要做一个单染孔②先设置电压，再调整补偿，保证读取样本时的电压与调整补偿的电压一致，也就是说补偿调好之后，不要再改变电压。③有些抗原表达弱，阳性群不明显，例如IFN-γ-PE，我们可以替换为CD3-PE或补偿微球替换。

调节补偿和仪器型号以及软件有很大关系，主要得到的流式结果没有问题，一般不用调，B站有些人会有视频教程，可以去看看

可以先调节阴性对照管：将原补偿清零，首先调节电压，通过调节电压，使阴性群落在FITC和PE双阴性区。FITC单染管：在理想情况下（没有荧光干扰），因检测管中不应该出现PE信号，但实际情况是在FITC与PE的双阳性区出现了荧光信号。这个信号就是PE探测器检测到的FITC信号。此时需要通过调节补偿参数，取合适的补偿强度来抵消PE中的信号。如下图所示，调节补偿（PE- %FITC ),使得两群细胞FL2的Mean/Median值相同或相近，或通过经验判断（原则为“横平，竖直”）。当PE探测器检测到的FITC信号恰好完全消除时，即PE信号与阴性对照一样时，PE对FITC的补偿调节完成。PE单染管：同理，将进入FITC探测器的PE信号通过补偿调节来消除。 当设置好以上补偿条件后，即补偿调节完毕。

一般用傻瓜型的C6是不用调补偿了，调补偿的目的是为了更好的区分阴性和阳性，所以你要做好对照，然后第一次做得时候，找你们平台得老师给你示范怎么通过调电压来更好的区分。

现在流式细胞仪都是自动调节荧光补偿，不过也要做好准备工作。如当我们同时检测四种荧光素FITC、PE、Per CP、APC，做补偿调节，需要以下的样本，无任何染色的样本，FITC， PE， Per CP以及APC单染阳性的样本，这里需要一共5个管子。

在纯手工的年代，你需要画出这四个颜色两两配对的散点图，比如FITC-PE， FITC-Per CP， FITC-APC， PE-Per CP，PE-APC， Per CP-APC，一共6个散点图。 然后，先上未染色的样本，调节各个荧光通道的电压，使细胞都位于各个散点图的左下角。 在记录前，把每个样本都先跑一边，目的是观察电压的设置是否正确。比如FITC和PE会有重叠，上FITC阳性管的时候，虽然其他通道会有些信号，但FITC通道的信号应该最强。如果发生了其他通道信号强于目的通道的情况，就要进一步调节电压，使目的通道的信号最强。这样把每一个单染的样本都过一遍，确保目的通道的信号最强。

现在的仪器软件，不需要你自己画这些散点图，但是调节电压的这一步是必须的，可以在阴性对照管的页面下完成。 电压调节好以后，记录阴性对照和阳性单染样本的信号，然后机器会自动计算补偿值。