吸附抗体的选择，非稀释，稀释？

我觉得要选择稀释还是非稀释，首先知道稀释液的作用，一般抗体稀释液最主要的作用有三点：

第一，缓冲体系，为抗体提供稳定的工作环境（离子浓度，pH等）；

第二，保护体系，长时间保持抗体稳定，防止抗体在低浓度下效价降低；

第三，封闭体系，辅助提高抗体特异性，减少非特异结合。不同的实验，对于以上三点需求各有侧重，所以抗体稀释液的配制也是有区别的。接下来小编以几种常用的实验来举例，详细说说该如何选择抗体稀释液。

WB，半定量检测蛋白表达的常用实验技术，利用电泳将不同分子量的蛋白分开，并转膜到蛋白亲和材料上后，利用特异性抗体来检测目的蛋白表达。由于抗体用量较大（一般是1-10ml工作液），且实验频次较高，往往需要抗体回收，多次利用。按照上面介绍过的三点，缓冲需求，一般采用PBS或TBS体系即可；保护体系则应更为侧重，通常需要用到BSA、明胶等多种载体蛋白，来提高整个体系中的蛋白浓度，防止抗体在低浓度下效价降低，为了回收使用的需求，还需加入NaN3等防腐剂成分，抑制微生物生长，延长抗体保存时间；封闭体系则较弱，因为WB的基质材料（NC膜或PVDF膜）较为简单，并且在抗体孵育前，需要进行封闭步骤，降低非特异亲和，缓冲液中的BSA等载体蛋白成分已可达到封闭需求，无需额外添加。在此，小编要再强调两点，WB实验，如果检测的目的蛋白为磷酸化蛋白，整个实验体系应采用Tris缓冲体系，抗体稀释液也应采用TBS体系，不要使用PBS体系；二抗如果使用HRP标记的二抗，稀释液则应避免使用NaN3作为防腐剂。

IHC，原位检测蛋白表达的实验技术，也是病理实验中最常用的实验技术。在IHC实验中，抗体稀释液的需求又有不同，缓冲体系和WB类似，PBS和TBS均可；保护体系则无需特别注意，因为通常来讲，IHC实验为节约抗体，采用组化笔圈住目的组织来进行，而抗体则无需回收；封闭体系更为侧重，组织成分更为复杂，非特异亲和更多，虽然经过封闭处理，抗体孵育步骤仍需注意采用封闭效应较好的稀释液，除BSA等蛋白外，还应含有5%左右的一抗来源同种属血清（通常为山羊或驴，根据一抗种属选择），降低抗体非特异结合导致的假阳性及背景杂信号。

选择抗体应先了解其反应谱和适用条件（包括适用切片、稀释度及温育时间等）。使用一种新抗体时，必须首先摸索出最佳浓度，所谓最佳浓度就是能获得最佳特异反应所需抗原的最低浓度。或者按照有关说明书的提示。

二、稀释

1.一般用0.01MPBS，PH值7.2；

2.或用0.05MTBS，PH值7.6；

酶标仪测量的实际是吸光度，稀释度太低的话反应的颜色会太深，测量值不准。

稀释倍数太高也是一样的，反应后的颜色会太浅，误差也会很大

1.一般用0.01MPBS，PH值7.2，2.或用0.05MTBS，PH值7.6；