抗体的稀释度稀释液及稀释度的测定方法

互联网2013-08-19

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抗体的稀释度包括特异性抗体，中间抗体及标记抗体。任何一种免疫组化方法要想得到令人满意的染色效果，必须将抗体进行最佳稀释。一般来说，抗体的稀释度取决于下列因素。

(一)抗体的浓度(亦称滴度)

每毫升溶液内所含抗体分子越多，滴度就越高，该抗体可高度稀释，尤其是特异性一抗的稀释度。一般商品化抗体只知道每毫升含多少抗体蛋白量，不知道所含抗体分子。自己制备抗体可通过琼脂糖双扩散或放射免疫法进行测定。

商品化抗体一般告知大约的稀释度，例如用PAP法可1：100～1：200稀释。但往往购买到一种新抗体后，需要利用组织切片进行最佳稀释度的测定。

(二)稀释度的测定方法

在测定抗体最佳稀释度时，可将阳性强度与背景染色以“+”形式来表达，“+ + + +”为极强阳性，“+ + +”为强阳性，“+ +”为弱强阳性，“+”为弱阳性，“一”为阴性。

1．直接测定法

按表2—4稀释抗体，4℃过夜，观察分析结果。从表2—4的结果中可知，400为最佳稀释度，因其特异性染色强，且背景低。

表2-4 抗体稀释度的直接测定法

一抗稀释度特异性染色强度非特异性一抗稀释度特异性染色强度非特异性

l： 50 + + + + + + l：400 + + + (一)

1：100 + + + + + + 1：500 + + (一)

1：200 + + + + + 阴性对照 (一) (一)

1：300 + + +

2．棋盘稀释测定法

按表2—5稀释、测定，从表中显示的结果可知，一抗1：100、二抗1：200为最佳稀释度。

表2-5 抗体稀释度的棋盘稀释测定法

第二抗体一抗稀释度

1 ： 50 l：100 1：200 1：400

1：100 + + + +(+ +) + + + +(+ +) + + +(一) +(一)

1：200 + + + +(土) +++(一) + +(一) +(一)

1：400 + +(一) +(一) (一) (一)

注：括号内为背景染色

(三)抗体的配制

抗体的配制及使用是开展免疫组织化学工作的一个重要环节，其检测的结果既要可靠，又要能重复，这就要求实验人员在配制抗体过程中要注意其精确度。目前，随着抗体稀释液的稳定性提高，一次稀释抗体可用一年。当然，还可以购买到商品化即用型一抗，使用非常方便。

(四)抗体稀释液的种类

可根据需要选择不同的抗体稀释液。如稀释当天用完的一抗，用0．05m01／L(pH7.6)TBS即可。

如需长期保存，可用如下稀释液：取0．1g明胶(或绿色明胶)溶在100ml0.05m01／L(pH7．6)TBS缓冲液中，边搅拌边加热至60℃，待完全溶解后，冷却至室温，加入1g牛血清白蛋白，最后加入200mg aN3，分装保存在一40℃中备用。另外，抗体原液应分装后一40℃保存，可保存5年以上。

(责任编辑：大汉昆仑王)