原理
乙酰胆碱在血液中被胆碱酯酶水解，产生醋酸和胆碱。在一定条件下，水解乙酰胆碱的量与胆碱酯酶的活性成正比。故在反应体系中，加入定量的乙酰胆碱使之参加反应，通过测定剩余的乙酰胆碱量即可计算出水解的乙酰胆碱量，从而推算出胆碱酯酶的活性。
乙酰胆碱的呈色反应：乙酰胆碱可与羟胺作用生成乙酰羟肟酸，后者在酸性条件下与三价铁离子形成褐色的羟肟酸铁络合物，其颜色的深浅可反映乙酰胆碱含量的多少。反应过程如下：
盐酸羟胺与氢氧化钠作用释放出游离羟胺
NH2OH·HCl＋NaOH NH2OH＋NaCl＋H2O
剩余乙酰胆碱与游离羟胺作用，生成羟肟酸化合物。
（CH3）3≡N－（CH2）2OCOCH3＋NH2OH CH3CONHOH＋ （CH3）3≡N－（CH2）2OH
羟肟酸化合物在酸性环境中与三氯化铁生成褐色的复合物（羟肟酸铁络合物）。
PH1～1.5
FeCl3＋CH3CONHOH （CH3CONHO）3 Fe＋HCl
乙酰胆碱的呈色反应：乙酰胆碱可与羟胺作用生成乙酰羟肟酸，后者在酸性条件下与三价铁离子形成褐色的羟肟酸铁络合物，其颜色的深浅可反映乙酰胆碱含量的多少。反应过程如下：
盐酸羟胺与氢氧化钠作用释放出游离羟胺
NH2OH·HCl＋NaOH NH2OH＋NaCl＋H2O
剩余乙酰胆碱与游离羟胺作用，生成羟肟酸化合物。
（CH3）3≡N－（CH2）2OCOCH3＋NH2OH CH3CONHOH＋ （CH3）3≡N－（CH2）2OH
羟肟酸化合物在酸性环境中与三氯化铁生成褐色的复合物（羟肟酸铁络合物）。
PH1～1.5
FeCl3＋CH3CONHOH （CH3CONHO）3 Fe＋HCl
材料与仪器
家兔
氯化乙酰胆碱 蒸镏水 盐酸羟胺 NaOH HCl FeCl3·6H2O Na2HPO4·12H2O KH2PO4
恒温水浴 分光光度计 试管架 中试管 吸管 滤纸 漏斗
氯化乙酰胆碱 蒸镏水 盐酸羟胺 NaOH HCl FeCl3·6H2O Na2HPO4·12H2O KH2PO4
恒温水浴 分光光度计 试管架 中试管 吸管 滤纸 漏斗
步骤
1. 取中试管加磷酸缓冲液0.85 ml，血样0.15 ml，置37±1 ℃的水浴中预热3～5分钟。
2. 加入7x10-3 mol/L Ach 溶液1.0 ml，GF 37±1 ℃的水浴中反应40 分钟（若反应不充分，可继续反应20分钟）。每隔10分钟振摇一次。
反应40分钟后立即加入碱性羟胺（1 mol/L NH2OH·HCl与3.5 N NaOH溶液在用前20分钟等容混合，并不时振荡）4.0 ml。
依次加入4 N HCl和3.7x10-1mol/L FeCl3各2 ml，每加一种试剂都要充分振荡。
上述反应液用滤纸过滤，将滤液倒入1.0 ml 的比色杯中，以530 nm的波长比色。
对照管
对照管1：为无血无Ach的其他试剂空白对照。
对照管2：为全血及试剂的空白对照，无Ach。
对照管3：（标准Ach值）：为反应系中全量Ach 的对照。
对照管的操作步骤与样品管相同。
表9-1 胆碱酯酶活性的测定步骤
计算：全血胆碱酯酶活性值以0.15 ml 全血在40 分钟内水解Ach 的uM数来表示（uM Ach/0.15 ml/40分钟）
酶活性值的计算：
全血胆碱酯酶活性值＝A3＋（A2－A1）－AS/A3－A1x7
A1，A2，A3和AS分别为对照管1，2，3和样品管的光密度值。A3－A1为单纯Ach全量的光密度值，A2－A1 为血液的光密度值，A3＋（A2－A1）为Ach. 血液和试剂的光密度值，A3＋（A2－A1）－AS 为分解的Ach的光密度值。
酶活性值的百分数计算：
样本全血胆碱酯酶活性值/正常全血胆碱酯酶活性值x100%。
2. 加入7x10-3 mol/L Ach 溶液1.0 ml，GF 37±1 ℃的水浴中反应40 分钟（若反应不充分，可继续反应20分钟）。每隔10分钟振摇一次。
反应40分钟后立即加入碱性羟胺（1 mol/L NH2OH·HCl与3.5 N NaOH溶液在用前20分钟等容混合，并不时振荡）4.0 ml。
依次加入4 N HCl和3.7x10-1mol/L FeCl3各2 ml，每加一种试剂都要充分振荡。
上述反应液用滤纸过滤，将滤液倒入1.0 ml 的比色杯中，以530 nm的波长比色。
对照管
对照管1：为无血无Ach的其他试剂空白对照。
对照管2：为全血及试剂的空白对照，无Ach。
对照管3：（标准Ach值）：为反应系中全量Ach 的对照。
对照管的操作步骤与样品管相同。
表9-1 胆碱酯酶活性的测定步骤
计算：全血胆碱酯酶活性值以0.15 ml 全血在40 分钟内水解Ach 的uM数来表示（uM Ach/0.15 ml/40分钟）
酶活性值的计算：
全血胆碱酯酶活性值＝A3＋（A2－A1）－AS/A3－A1x7
A1，A2，A3和AS分别为对照管1，2，3和样品管的光密度值。A3－A1为单纯Ach全量的光密度值，A2－A1 为血液的光密度值，A3＋（A2－A1）为Ach. 血液和试剂的光密度值，A3＋（A2－A1）－AS 为分解的Ach的光密度值。
酶活性值的百分数计算：
样本全血胆碱酯酶活性值/正常全血胆碱酯酶活性值x100%。
来源：丁香实验
