组织免疫荧光失败问题
丁香实验
以前自己染的人体组织步骤没问题，一抗测试过是没问题的，DAPI没问题，种属结合没问题。这次染色红色荧光下产生许多散在亮点（没有预期的目的荧光），这次亮点还是特异的（与绿色荧光对比过）~个人怀疑是否二抗出了问题（-18°避光放了一年了）这种散在亮点又没有目的表达的原因是什么？
分享
8 个回答
西柚味的芋圆
有帮助
可能是二抗保存不放。这种散在的光点就要看你的洗液了，最后一步封片之前要用去离子水而不是pbs洗，这些非特异性的光点可能是离子染色导致的
lyang556
有帮助
可能是二抗的问题，一是储存时间长可能被污染，二要看看是否失效。
CXCR3
有帮助
需要考虑一下洗抗体过程是否彻底，片子上非特异性的标记可能和二抗失效有关。
txs900416
有帮助
主要是需要考虑两个抗体的问题，一抗是否过期，二抗是否污染，此外也要注意封闭做好了没
咸水鱼rain
有帮助
可能是二抗的问题，那就使用没有问题的二抗做一个阳性对照
peaceful13
有帮助
很有可能抗体放置时间久了，荧光二抗的聚集物所产生的现象，将抗体离心，取上清染色试试看
颜渊溪桥
有帮助
考虑样本是否没有做好封闭，另外是否二抗污染了。
dxy_0mxazdaw
有帮助
如果一抗没问题，应该就是二抗不好用，可以适当增加二抗浓度和染色时间，或者重新调整共聚焦参数，也可能是激光强度不够。
相关问答
提问
扫一扫
实验小助手
扫码领资料
反馈
TOP
打开小程序