用免疫荧光的方法检测 LC3 可以么？怎么计算？

免疫荧光染的是会同时染LC3I 和II 的，这种方法也没问题，在正常细胞和受刺激的细胞中都会有LC3的光点，二者的区别是受刺激的成团块状，正常的呈散点状。。。在一些可能会影响LC3的翻译的条件下，可能受刺激的细胞表现为光点也会变多，这个好理解。。。而在自噬基础水平比较低的状态，给了刺激可能也看不出太大区别时可以考虑转染，相当于给个放大镜，放大这一过程。

转染LC3是检测外源性的自噬，正常也需要做内源性LC3检测，免疫荧光比值可通过显微镜配套软件计算

染内源的蛋白经常出现非特异的点，而自噬发生时就是看lc3聚集成点的情况，没有自噬时lc3是弥散分布在核内外的，过表达gfp_lc3是比较经典的检测自噬的方法，只要做好对照，结果非常可信。检测的方法就是看它成特异的点的情况。

免疫荧光直接检测LC3的话，是总的LC3吧，也就是说包含了LC3I和II，并不能说明LC3-II表达多吧，而转染GFP-LC3应该是直接定位于自噬体膜了，也就是能检测LC3-II，可以体现自噬流聚集的过程。此外LC3II表达本来就低，虽然转染是间接方法，但可以轻易反映出lc3的变化，直接免疫荧光可能由于本底影响看不太出来

可以，免疫荧光检测LC3，一般检测LC3-II，观察细胞中LC3-II的斑点形成。

是可以用免疫荧光的方法的，但是最好将LC3固定一下，这样防止降解。

用GFP-LC3的方法检测优点 可以很方便的用流式去检测，这样计算荧光强度还是比较准确的。