组织免疫沉淀中染色质的制备
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实验步骤
1) 用刀片将冰冻或新鲜组织切成小块 (1-3 mm3 )。
2) 取一个空的 15 ml 锥形离心管,称重,放入组织后再次称重,计算组织重量。
3) 在通风橱中配制交联所用溶液。每克组织加 10 ml PBS。加入终溶度 1.5% (v/v) 的甲醛,室温旋转 15 分钟。
4) 加入甘氨酸至终浓度 0.125M,以终止交联反应。继续室温旋转 5 分钟。
5) 组织样本离心,4 °C 720 rpm,离心 5 分钟。
6) 吸弃培养基,用 10 ml 冰上预冷的 PBS 洗涤。4 °C 720 rpm,离心 5 分钟,弃掉洗涤缓冲液。
2) 50-100 mg(3-4 块)的组织用 1ml PBS 重悬。
4) 将 18 号钝圆的针头连接到 1 ml 注射器上,将其插入锥形研磨管中收集细胞。将细胞加入一个锥形管中,冰上放置。
6) 镜下观察细胞悬液,以确定得到的是单细胞悬液。如果需要进一步研磨,可在组织中加入更多的 PBS,重复步骤 2.2 到 2.5,直至所有组织均研磨成均一的悬液。
7) 将细胞离心,1000 rpm, 4 °C,离心 10 分钟。估算细胞沉淀的体积以备下一步操作。