果蝇 S-190 染色质重组抽提物的制备

1. 试剂准备：

脱色洗液：50％（V/V）家用漂白剂的蒸馏水溶液

胚胎洗液：0.7％（m/V）NaCl/0.4％（V/V） Triton X－100， 室温和 4℃

盐洗液：0.7％ （m/V） NaCl， 4℃

缓冲液 R，4℃

1 mol/L MgCl₂

液氮

2. 细尼龙网在支撑物上放好，将约 100 g 0～6 h 果蝇胚胎放在网上。用冰冷的水冲洗以去除酵母和其他污染物。

3. 将胚胎浸泡在 3L 室温的脱色洗液中 90 S。用 1L 室温的胚胎洗液快速清洗胚胎。再用蒸馏水彻底冲洗。将胚胎转移到冰上的 800 ml 玻璃烧杯中。

4. 除非另外指出，均在冰上或冷室操作。加入 500 ml 4℃ 的胚胎洗液，用玻璃棒搅动 重悬胚胎。使胚胎沉到烧杯底部，静置 2 min。用真空吸气机吸出胚胎洗液，注意不要碰到烧杯底部的胚胎。

5. 再加入 500 ml 4℃ 的胚胎洗液重复步骤 3。

6. 重复步骤 3 两次，每次使用 500 ml 4℃ 的盐洗液，并且每次静置 5 min， 使胚胎沉到 烧杯底部。

7. 重复步骤 3 两次，每次使用 500 ml 4℃ 的缓冲液 R，并且每次静置 10 min， 使胚胎 沉到烧杯底部。清洗完第二次后，吸出缓冲液到只剩 80 ml。

8. 将烧杯中的物质转移到冰上的 40 ml Wheaton 杜恩斯匀浆器中。使用 B 型研磨棒匀浆 15 次，再使用 B 型研磨棒匀浆 40 次。如果还有剩余的物质存在，重复匀浆。确定已经完全匀浆。

9. 将匀浆液转移到冰上的 17 mm×100 mm 聚丙烯管中。4℃，7500 g （Sorvall SS－34 转子 8000r/min） 离心 5 min。从管的中间吸取上清转移到 50 ml 锥形管中。

10. 用 1 mol/L MgCl₂ 调节镁离子浓度为 7 mmol/L。

11. 将上清转移到 14×89 mm 薄壁超速离心管中。4℃，200 000 g （使用 Beckman SW41 转子的超速离心机 40 000 r/min） 超速离心 2.25 h。

12. 用金属刮刀除去每管的白色脂上层并丢弃。收集金棕色的液体层并集中到冰上的 50 ml 锥形管中。在液氮中速冻。

13. 在室温水浴中解冻抽提物。4℃，192 000 g （使用 Beckman SW55 转子的超速离心机 45 000 r/min） 离心 2.25 h。

14. 如果有白色脂上层则去掉。得到的 S-190 抽提物转移到 50 ml 锥形管中。将抽提物分装到微量离心管中，每管 1ml，并在液氮中速冻。-80℃ 可以保存 3 年。