果蝇唾腺染色体的制备和观察
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实验七 果蝇唾腺染色体的制备和观察
一、实验目的
1. 练习分离果蝇幼虫唾腺的技术,学习唾腺染色体的制片方法
2. 观察了解果蝇唾腺染色体的形态学及遗传学特征
二、实验原理
1. 果蝇是双翅目昆虫,幼虫期具有很大的唾腺细胞,其中的染色体是巨大的唾液腺染色体;
2. 唾液腺染色体不断地进行自我复制而不分开,经过许多次的复制形成约1000~4000拷贝的染色体丝,合起来达5mm宽,400mm长,比普通中期相染色体大得多(约100~150倍),所以又称为多线染色体;
3. 唾液腺染色体具有许多重要特征,为遗传学研究的许多方面,如染色体结构、化学组成、基因差别表达等提供了独特的研究材料。
三、实验材料与器具
• 三龄幼虫
• 0.9%生理盐水
• 胭脂红染色液
• 解剖镜 解剖针 吸水纸
四、实验步骤
(1)剥离唾腺
在一干净的载玻片上滴一滴生理盐水,选择行动迟缓、肥大、爬在瓶壁上即将化蛹的三龄幼虫,或者选择经低温处理的果蝇三龄幼虫置于载玻片上。
每只手各持一个解剖针,在解剖镜下进行操作。果蝇的唾腺位于幼虫体前1/3-1/4处,左手持解剖针按压住虫体后端三分之一的部位,固定幼虫,右手持解剖针扎住幼虫头部口器部位,适当用力向右拉唾腺腺体随之而出。
唾腺是一对透明的棒状腺体,外有白色的脂肪组织(不透明)。去除幼虫其它组织部分,并把唾腺周围的白色脂肪剥离干净。
果蝇唾腺剥离示意图
(2)染色: 吸去生理盐水,注意操作时要边观察边吸湿,最好用解剖针轻压,防止连同唾腺一起吸走;滴加胭脂红染色液,染色20-30min
(3)压片: 染色完成后,盖上干净的盖片,并覆一层 滤纸 。将片子放在实验台上,用大拇指均匀用力压片。(注意不要使盖片移动。)
五、注意事项
1. 一定加生理盐水,否则唾腺易干。
2. 将脂肪组织清除干净
3. 水不可太多,否则幼虫会漂浮而且活跃
4. 染色时间不可过长,否则背景也着色
5. 压片时要揉,用力要均匀
6. 染色完以后,将旧的染色液吸去,加新的染色液,再压片
7. 吸水时勿将唾腺一起吸走
六、实验结果观察
1.检查你制作的制片,寻找形态良好、分散适中的图象仔细观察各条臂的特点。
2.画出所制染色体的形态,大小,并标出明显的横纹特点。