果蝇唾腺染色体的观察

一 实验目的

　　1．学习和掌握剥离果蝇三龄幼虫的唾腺和压制唾腺染色体玻片的方法；

　　2．了解果蝇唾腺染色体的特点，根据不同染色体带纹的形态和排列识别不同的染色体。

二 实验原理

　　双翅目昆虫(摇蚊、果蝇等)幼虫期的唾腺细胞很大，其中的染色体称为唾腺染色体。这种染色体比普通染色体大得多，宽约5um，长约400um，相当于普通染色体的100—150倍，因而又称为巨大染色体。唾腺染色体处于体细胞染色体联会配对状态。

并且唾腺染色体经过多次复制而并不分开，每条染色体大约有1000—4000根染色体丝的拷贝，所以又称多线染色体。多线染色体经染色后，出现深浅不同、密疏各别的横纹，这些横纹的数目和位置往往是恒定的，代表着果蝇等昆虫的种的特征；如染色体有缺失、重复、倒位．易位等，很容易在唾腺染色体上识别出来。

　　观察多线染色体的特征：巨大；体细胞中同源染色体配对，所以细胞中染色体只可以观测出半数(n)；各染色体的异染色质的着丝粒部分互相靠拢形成染色中心(chromocenter)；横纹有深浅、疏密的不同，各自对应排列，这意味着基因的排列。

三 实验材料

　　果蝇的三龄幼虫

四 实验器具和药品

　　实体解剖镜、载玻片、盖玻片、常规解剖器具、生理盐水、改良苯酚品红染液。

五 操作步骤

　　1．把载破片置于双筒镜下，选择黑色背景。载玻片上滴加生理盐水一滴，取三龄幼虫放在其中，操作者左手拿镊子夹住幼虫后端1/3处，固定幼虫。右手拿一枚解剖针，按住幼虫头部的黑色斑点（口器）稍后方，用力向两侧拉，把身体拉开，唾腺随之而出。唾腺是一对透明的棒状腺体，像一对长茄子，上面附有白色的脂肪条。

　　2．在载玻片上除去幼虫其他组织部分，还要把唾腺周围的白色脂肪尽量剥离干净，再把唾腺周围的杂物用吸水纸清理干净。注意此时动作应放慢，因唾腺很小，很容易随水流的移动而进入到吸水纸中。

　　3．滴加一滴改良苯酚品红溶液，染色10～15分钟。

　　4．盖上盖破片，以解剖针柄轻轻敲击有唾腺的部位，使其随着染液的流动而充分的分散，最后进行压片观察。可先在低倍镜下观察，选取染色体分散较好的细胞放于高倍镜观察。唾腺染色体具有以下特点：巨大性、体细胞配对、具有染色中心(Chromocenter) 、染色体上具有明暗相间的横纹。

六 注意事项

　　果蝇唾腺为单层细胞构成，在解剖和制片过程中注意保湿；

　　唾腺体积很小，染色时染色液不要过多，以免压片时唾腺随染液流走。

　　果蝇唾腺染色体组成为2n＝8，因为体细胞配对，又因短小的第4染色体和X染色体的着丝粒在端部，所以染色体的一端在染色中心上，看上去，各自只形成一条点状和线状染色体。只有第2和第3染色体的着丝粒在中央，它们从染色中心以V字形向外伸出(2L、 2R 、3L、 3R)，因此共有6条臂。

由于短小的第4染色体有时不易现察到，所以最容易识别的是5条染色体长臂。雄果蝇的Y染色体几乎包含在染色中心里，因为是异染色质，看起来染色可能淡些。有经验的人可以发现雄果蝇的x染色体比雌果蝇x染色体要细些，因为雄性只有一条x染色体。　

　　唾腺染色体上的横纹宽窄、浓淡是一定的，但在果蝇的特定发育时期，它们会出现不连续的膨胀，称为疏松区，目前人们认为这是这部分基因被激活的标志。
　　
七 学生实验报告

　　培养观察果蝇唾腺染色体的三龄幼虫时应注意什么问题，以取得适宜的实验材料？

　　绘制果蝇唾腺染色体图，并说明其特点。

果蝇杂交

预期实验结果

伴性遗传：正交：F1雌雄都为野生型；
　　　　　　　　F2雌：为野生型，
　　　　　　　　雄：红：白 1：1
　　　　　反交：F1雌：野生型
　　　　　　　　雄：白眼
　　　　　　　　F2雌：红：白 1：1
　　　　　　　　雄：红：白 1：1

三点测交：反交：F1：雌：野生型
　　　　　　　　雄：三隐性
　　　　　　　　F2：亲本型 多
　　　　　　　　重组型