果蝇的唾腺染色体的制片与观察

一、目的
通过对果蝇唾腺染色体的观察，了解巨染色体的特征，练习果蝇幼虫解剖技术及唾腺染色体制片方法。
二、材料
果蝇三日龄幼虫
三、原理
果蝇幼虫期的唾腺细胞核非常大，唾腺染色体比其它细胞的染色体大200多倍。且总是处于前期状态，两条同源染色体间有差别时，很容易看出来。例如，当一条染色体缺失一个片段时，它的同源染色体在这一段不能配对，就会拱起来，形成一个弧状结构。此外，重复、倒位、易位等染色体畸变也可看到，所以唾腺腺染色体是研究染色体畸变的好材料。
唾腺染色体上有明显的横纹，其相对大小和空间排列是恒定的，可以作为识别唾腺染色体的标志。
四、实验准备
1．用具：双筒解剖镜，镊子，解剖针，载玻片，盖玻片，培养皿。
2．药品：醋酸洋红或醋酸地衣红，冰醋酸，生理盐水0.7%Nacl，1NHC1， 蒸馏 水，无水乙醇。
五、实验步骤
1．取一干净的载玻片，其上滴一滴生理盐水，取一三龄幼虫置于生理盐水中，两手各握一枚解剖针，以左手针压住幼虫末端1/3处，另一针揿住幼虫头部，用力向前拉，把头部身体拉开，腺体即随之而出。黑点是它的神经节，唾腺就在神经节的下面。
2． 低倍显微镜下观察，唾腺是一对棒状的腺体，中间有一细丝相连，腺体由两层规则排列的细胞组成。找到腺体后，用针剔除脂肪。
3．在载玻片上把幼虫其他部分除去，并用吸水纸吸去生理盐水。
4．在腺体上滴一滴1NHC1，浸泡2-3分钟，HCL的作用是使组织疏松，易于压片和获得良好的图象。
5．吸去HCL，滴一滴 蒸馏 水，再用吸水纸吸去，反复两次。
6．加一滴醋酸洋红（或醋酸地衣红）染液，染色30分钟。
7．加盖玻片、压片，显微镜观察。
8．好的片子可以制成永久片，把片子依次移入含有下列溶液的培养皿中，固定液（冰醋酸：酒精=3：1，在固定液中的时间以盖玻片脱下来为准）——纯酒精——纯酒精——二甲苯——二甲苯——加拿大树胶封片。
9．待封胶干后观察，贴好标签。