果蝇唾腺染色体制片及观察

一、实验目的

学习剖离果蝇幼虫唾腺和压制唾腺染色体标本的方法；观察唾腺细胞的巨染色体。

二、实验原理

果蝇的唾腺位于幼虫前端的食道两侧和神经球附近。剖取果蝇唾腺细胞进行制片观察，可见到一个由4对染色体的着丝粒结合形成的染色中心，以及向四周伸展的5条染色体臂（X、2L、2R、3L、3R），其中第4对染色体为粒状，与染色中心密切相联，总称为唾腺染色体。

果蝇唾腺染色体是一种典型的多线染色体。它是果蝇唾腺细胞核内有丝分裂所致，即核内染色体中的染色线连续复制而染色体并不分裂，结果使每条染色体中的染色线多达500～1000条，其长度和体积分别比其它细胞的染色体长100～200倍、大1000～2000倍，因此也称巨型染色体。

由于每条染色体的染色线在不同的区段螺旋化程度不一，因而出现一系列宽窄不同、染色深浅不一或明暗相间的横纹。不同染色体的横纹数量、形状和排列顺序是恒定的。利用这些特征不仅可以鉴定不同的染色体，还可以结合遗传实验结果进行基因定位。

此外，由于其体细胞同源染色体的配对，故易于进行染色体的缺失、重复、倒位和易位的细胞学观察和研究。

三、材料、 仪器与试剂

1 材料 果蝇三龄幼虫。

2 用具 显微镜、双目解剖镜、培养瓶、载玻片、盖玻片、镊子、解剖针、吸水纸、酒精灯等。

3 药品 试剂 无水酒精、冰醋酸、1%醋酸洋红、改良品红、0.7%NaCl、1mol/L盐酸、 蒸馏 水。培养基：玉米琼脂培养基。

四、实验步骤

1 幼虫培养 为使幼虫长得肥大、嫩白，应避免瓶内幼虫过分拥挤，可置于16～18℃下饲养，当幼虫爬上瓶壁准备化蛹前，即为三龄幼虫，此时虫体肥大，便于解剖，是制备唾腺染色体的最理想时期。

2 腺体剖取 选取发育良好、虫体肥大的三龄幼虫，置于载玻片上，加几滴0.7%生理盐水，在双目解剖镜下左手持解剖针压住虫体中后部，右手持解剖针按住头部（即口器稍后处），轻轻向前拉动，使头部扯离虫体，从而拉出唾腺。

腺体为一对囊状结构，位于食道两侧，由单层细胞构成，在解剖镜下成透明状态；腺体侧常有少量泡沫状脂肪体，呈乳白色当剔除；最后留下一对腺体待用。整个剖取过程须在生理盐水中进行。

3 解离 把载玻片上的幼虫其它部分除去，用吸水纸小心吸去生理盐水（注意吸水纸应离唾腺远些，以免吸附唾腺），加1滴1N HCl，浸2~3分钟，使组织疏松，以便压片时细胞分散，染色体散开。

4 染色 用吸水纸吸去盐酸，加1滴 蒸馏 水轻轻冲洗后吸干，加2滴醋酸洋红或改良苯酚品红染液，染色5～20分钟（此过程应保持腺体一直处于染液的浸泡中）。

5 压片 如果染液有沉淀，可换上新鲜染液或45%醋酸，盖上盖玻片压片，然后用吸水纸包被玻片，吸干多余染色液，并用手指轻压盖玻片，再用铅笔的橡皮头或解剖针柄垂直轻敲，或进一步用拇指在盖玻片上适当用力压片，注意勿使盖玻片移动。