用 HeLa 做自噬， LC3ii 型的变化不怎么明显，怎样才能做出有差异的图像？

免疫荧光染的是会同时染LC3I 和II 的，这种方法也没问题，在正常细胞和受刺激的细包中都会有LC3的光点，二者的区别是受刺激的成团块状，正常的呈散点状。。。在一些可能会影响LC3的翻译的条件下，可能受刺激的细胞表现为光点也会变多，这个好理解。。。而在自噬基础水平比较低的状态，给了刺激可能也看不出太大区别时可以考虑转染，相当于给个放大镜，放大这一过程。。。 这是我这个课题结题之后重新审视这个问题得出的答案。。。autophagy那篇文献只能说用来扫扫盲可以，但是具体问题还得具体分析，还得查自己相关的文献，那篇文献也在不停的改，连原则性的东西都改了，可以对照2008和2012这两个版本看看。。

我们之前染LC3ii也出现过变化显示不明显的情况，如果有条件的话，可以尝试用流式去检测LC3ii，利用histogram的展示方法，可以显示出对照和实验的差别

LC3-II易降解，通常会使用氯喹阻断降解；另一方面，可以配12%-15%SDS-page胶，这样跑出来的LC3两条条带分得开，并且条带明显，好看！

LC3-II容易被溶酶体降解，建议使用氯喹阻断降解，分析自噬的动态过程

首先查一下你用的抗体，我记得MBL公司的LC3非常好用，并且抗体上的不要太多正常1:1000-1:2000都可以，能反复用三次。 第二，HeLa正常培养（不饥饿）LC3-II是不强的，所以也可能是实验操作问题，收样品前6-12小时换下液会好些。 第三，实在无法解决就show两张图，短曝光与长曝光，放文章里是没有问题的。