敲低过表达

因为自己构建时间成本太高，还容易失败，现在发文章一般都需要敲低过表达双向验证，建议你提前做好准备

过表达载体：重点关注启动子、标签和选择标记。其中选择标记主要目的是区分表达与非表达目的基因的细胞。

敲低（减、降）表达载体：启动子选择 U6；标记选择通常跟过表达类似，尽量选择绿色荧光和 PURO。

敲除载体：目前最常用的就是 CRISPR-Cas9 的基因敲除载体，该系统是个二元结构，需要在同一个细胞中一起表达 Cas9 和针对目的基因的 sgRNA，优先推荐二合一型载体。

选择敲低或过表达目标基因的方法可以从以下几个方面考虑:

1. 效率和稳定性:慢病毒系统效率高,可得到稳定敲低或过表达细胞株;siRNA敲低 temporary。

2. 负责制:病毒系统可能对宿主细胞有影响,需评估安全性。siRNA影响较小。

3. 细胞类型:对难转染细胞,病毒系统转导效率较好。siRNA可用于多种细胞。

4. 作用方式:siRNA主要下调mRNA水平,对编码蛋白水平影响有延迟;病毒系统可直接作用于蛋白表达调控。

5. 目标基因特点:对一些结构域复杂的蛋白,siRNA效果可能不佳,可考虑病毒系统。

6. 试验目的:探究机制性研究,可短期使用siRNA;需要稳定细胞株改造,则病毒系统更优。

7. 经费:病毒系统构建一般需外包,成本较高;siRNA价格相对低廉。

PLIN3作为蛋白结构较复杂的脂落相关蛋白,使用病毒系统可能效果更好。

综合考虑目标基因、细胞类型、实验目的和经费等因素,从中选择最适合的方法。