cq2019
我培养的细胞是THP-1,用慢病毒来感染细胞的时候,用的滴度为30,结果感染48小时后,发现荧光的亮度和强度都不明显,我应该怎么设置荧光呢?
sswei
可能存在启动子表达较弱,残留有氨基酸等情况
bamboopiggy
thp1用慢病毒感染时,要用离心机离心增加感染效率。虽然荧光不是很好,可以收样检测一下,是否过表达或敲低成功
huarenqiang5
荧光的强度取决于病毒进入到细胞的颗粒数、细胞状态、细胞类型、观察时间等因素,荧光表达的强度与目的细胞感染病毒的颗粒数正相关,一般感染细胞后72h观察荧光强度最佳,而增殖较慢的细胞可以适当延长时间。建议你72小时左右再观察看看。
loveliufudan
如果在使用慢病毒感染THP-1细胞时,荧光信号的强度和亮度不明显,可以考虑以下几个方面来调整:
滴度:尝试增加病毒的滴度,通常在30滴度下不会产生足够的感染。可以使用不同浓度的病毒进行感染实验,以确定适宜的感染浓度。
感染时间:尝试增加感染时间,通常48小时可能不足以充分感染细胞。可以尝试延长感染时间并观察结果,但需注意过长时间的感染可能导致细胞毒性。
选择合适的载体和荧光基因:慢病毒感染需要用到载体和荧光基因。不同的载体和荧光基因会影响荧光信号的强度和亮度。可以考虑更换载体和荧光基因来增强信号。
细胞密度:如果细胞密度过高,可能会影响感染效率。可以尝试使用适当的细胞密度进行感染。
细胞状态:细胞状态也会影响感染效率。在进行感染实验前,应确保细胞处于健康状态,细胞质量好。
总之,要优化慢病毒感染的荧光信号,需要考虑多种因素,并进行逐一排除或优化。
毛利小五郎的徒弟
可以试着增强病毒载量或者更换敏感性强的荧光剂。
dxyc42u
下次可以把观察时间缩短后观察下
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