病毒滴度的问题

bioangelwx15问：

本人刚做慢病毒赶染实验，有些问题还不懂，想请教下大家，病毒感染细胞时是不是只要病毒的量够就行了呢？是不是病毒滴度大就少加病毒液，滴度小就多加呢？当然，前提是我要保证感染的细胞有充足的氧气供应，即使病毒液多加也有氧气供应，只是我不知道病毒浓度大小对感染细胞的效率有影响么？

也就是说当病毒总量一定，病毒滴度大感染时加的量少和病毒滴度小，感染时加的量大，感染效率会不会一样呢？问题很弱，我是个新手，还望大家不吝赐教啊，感激，感激：）

丁香园网友ggppllzzww认为：

首先要肯定的是病毒的总量一定要够也就是要达到细胞的多少倍

其次浓度要在一定时间一定范围内要恒定达到一定浓度太大伤害细胞太小影响转染效率

我是这么做的：细胞换液时，把培养基吸干净，另取一个ep管，加一定量的新培养基（以刚好覆盖培养皿底部为佳），把要加的病毒加在这个ep管里混匀，均匀加在培养皿底部，把培养皿放在细胞培养箱中，30-60分钟后，病毒转进细胞中，再补足培养基，继续培养。

这种方法，转染效率高，而且效率恒定，避免了病毒浓度过大或者过小的问题

丁香园网友bioangelwx15认为：

我的实验是将组织块消化打散成单细胞，然后病毒感染（也就是要做过表达），然后再把细胞重聚，移植，所以不是在培养皿中感染细胞，我想将组织在ep管中打散成单细胞后，加入200μl病毒液感染2小时，之后离心细胞，吸去上清，再加入200μl病毒液，37度再感染1小时（由于细胞此时是沉淀在管底的，这1小时还起到了孵育的作用），你觉得这样行吗？

另外，我的组织细胞高度需氧，我还想过将组织细胞打散重聚后，直接放在器官培养皿中的滤膜上，然后再在培养液中加病毒液（也为200μl，不过因为还加了培养液，实际病毒浓度变小了，但病毒数量与前一个方法的相同），这样就能保证细胞团在气——液交界面生长而不至于缺氧死亡，但这样是不是感染效率就要低的多呢？

丁香园网友ggppllzzww认为：

把两次转染的病毒量都放在200μl液体里一起转染 或者直接加400μl病毒液转染一次就好 然后直接加培养液培养就行了因为细胞刚感染了病毒以后会很脆弱的 离心恐怕不行看你的实验过程难道你做的是骨髓间充质干细胞？