泛素化实验中阴性对照的泛素化程度却很深

请教下园子里的师兄师姐们，我在做泛素化的时候，工具细胞用的293t，发现仅过表达底物和UBI，通过ip底物就能检测出很强的泛素化水平，甚至高于加了E3和E2的组别，但是在我所做的乳腺癌癌细胞中敲减E2和E3，底物都会明显上升。1，是不是说明这个底物不能用293t来做泛素化试验呀，2，这个时候怎么继续做泛素化实验呢？3，我的这个底物是在细胞核表达的，E2和E3也是在细胞核，那核蛋白的泛素化是不是需要用其他的方法来做呢？