wb跑内参有条带丢失

xin122

2022-11-16

跑内参的时候用的15孔的梳子，跑了10组样品，但是显影出来只有6个条带，跑了好几次都有不同的条带丢失，不知道是哪里出了问题。

我的猜想:1.蛋白降解?

2.转膜时间过长?(我转了60min-90min)

3.三明治没夹紧?(我加了两层滤纸)

4.转膜有气泡?(我已经尽量排气泡了)

5.一抗孵育不均匀?

请大家帮忙解答一下，我实在迷惑。

balalaLy

2022-11-17

有帮助

你列举的5点可能的问题中2-5的可能性不大，因

为不会这么刚刚好只出现一个孔的条带不见了。很可能是你的蛋白降解或者浓度特别低

土井挞克树

2022-11-17

有帮助

看条带考虑还是蛋白降解，注意控制温度，不要太高

NatureBios

2022-11-16

有帮助

按照你的描述，多次，而且是各不相同泳道样本，蛋白印迹不出，这个现象属于操作上的因素，转好的膜丽春红染色，查看电泳和转印的效果，转印时夹子夹好，赶走气泡，抗体孵育不均(孵育时，印迹膜泡在抗体稀释液中)