泛素化实验问题——泛素化条带不均匀

实验求助：做泛素化实验次数很多，但条带总是不稳定，我是转染HA-Ub，孵HA抗体显示泛素化。有时候一条里是均匀的，但有时候条带看上去一片一片的深浅不一，换了转膜的膜也还是有这样的问题。转膜的操作一直都是一样的，孵条带就没问题，底物都能正常孵出来，而且不存在这样缺失的问题。究竟是为什么啊？好绝望！求大神鼎力相助！