蛋白提取问题细胞蛋白提取

都可以，但是如果近期要跑的话还是建议煮完放-20

提完你先要测一下蛋白浓度，后面好根据浓度计算上样体积，然后加loading buffer煮10分钟，后面在用就是煮3分钟每次即可。

建议提完，就煮了，然后放-20或-80都可以，如果样品比较珍贵，建议分装保存，反复冻融别太多次了，否则容易降解。

正确做法：加入上样缓冲液，煮十分钟，分装，尽早跑WB,暂时不用的放于-80度冰箱。

为什么这样做：

1.煮的作用：可以破坏蛋白的疏水和氢键，破坏高级结构，使蛋白变性。

2.上样缓冲液的作用：含有还原剂和SDS，还原剂破坏了二硫键，SDS破坏疏水，从而实现变性蛋白的目的。

3.低温的作用：降低温度是为了减缓分子运动，降低碰撞，减缓目的蛋白的降解，因此温度越低越好！

4.负80度，还存在分子运动，所以应该先变性，在储存。

蛋白分装在-80°保存，要用就取一管出来存放在-20，再放到-4°,逐步让蛋白慢慢融化，完全融化再取用，用完放回-20°

直接放到-80℃冰箱冻存。做WB的时候再加入Loadingbuffer沸煮变性。