核蛋白提取
丁香园
4831
1. 前言
真核细胞的核被含有鱗脂的双层膜包裹。内层的核膜决定了细胞核自身的边界。在许多细胞中，外层核膜与糙面内质网相连。内外层核膜之间的空间与糙面内质网内腔相通。内外核膜在核孔处相连在一起。用冰冻蚀刻技术可以清楚地观察到这一现象。在分裂间期的核中，染色体呈 25 nm 粗的细长丝状，并且无法通过光学显微镜观察到。不过，在光学显微镜下可以很容易地认出细胞核中的一种亚细胞器结构。核仁形成区是一个或多个染色体上与核仁相连的区域，它包含了许多指导核糖体 RNA 合成的 DNA 的拷贝。大多数的核糖体 RNA 是在核中合成的；当核糖体 RNA 通过核孔进入细胞质时，一些核糖体蛋白被在核仁中添加到核糖体 RNA 上。
细胞中不同的细胞器在大小和密度上均有差别。大多数分离手段的起始阶段使用差速区带离心或差速离心。此技术利用了超速离心产生的很强的沉积力。最初，人们利用 2.0 mol/L 蔗糖密度梯度离心或 Percoll 密度梯度离心的方法从水稻悬浮细胞中分离细胞核 。Morre 和 Anderson 报道了一种改进的蔗糖密度梯度离心方法。该方法被证明能从水稻悬浮细胞中更加快速有效地提取核。细胞核是平均直径 20 μm 的均匀球体。豌豆细胞核同样是平均直径 20~30 μm 的均匀球体，但拟南芥的细胞核直径更小 ( 5~10 μm) 且不是球形。在植物中，已有关于水稻和拟南芥细胞核蛋白质组成分的报道。在水稻中，利用双向电泳分辨出了等电点为 4~10 的 549 个核蛋白。此结果与 Bae 等报道的拟南芥核蛋白的工作一致；他们检测到了等电点为 3~10 的 544 个蛋白质。
真核细胞的核被含有鱗脂的双层膜包裹。内层的核膜决定了细胞核自身的边界。在许多细胞中，外层核膜与糙面内质网相连。内外层核膜之间的空间与糙面内质网内腔相通。内外核膜在核孔处相连在一起。用冰冻蚀刻技术可以清楚地观察到这一现象。在分裂间期的核中，染色体呈 25 nm 粗的细长丝状，并且无法通过光学显微镜观察到。不过，在光学显微镜下可以很容易地认出细胞核中的一种亚细胞器结构。核仁形成区是一个或多个染色体上与核仁相连的区域，它包含了许多指导核糖体 RNA 合成的 DNA 的拷贝。大多数的核糖体 RNA 是在核中合成的；当核糖体 RNA 通过核孔进入细胞质时，一些核糖体蛋白被在核仁中添加到核糖体 RNA 上。
细胞中不同的细胞器在大小和密度上均有差别。大多数分离手段的起始阶段使用差速区带离心或差速离心。此技术利用了超速离心产生的很强的沉积力。最初，人们利用 2.0 mol/L 蔗糖密度梯度离心或 Percoll 密度梯度离心的方法从水稻悬浮细胞中分离细胞核 。Morre 和 Anderson 报道了一种改进的蔗糖密度梯度离心方法。该方法被证明能从水稻悬浮细胞中更加快速有效地提取核。细胞核是平均直径 20 μm 的均匀球体。豌豆细胞核同样是平均直径 20~30 μm 的均匀球体，但拟南芥的细胞核直径更小 ( 5~10 μm) 且不是球形。在植物中，已有关于水稻和拟南芥细胞核蛋白质组成分的报道。在水稻中，利用双向电泳分辨出了等电点为 4~10 的 549 个核蛋白。此结果与 Bae 等报道的拟南芥核蛋白的工作一致；他们检测到了等电点为 3~10 的 544 个蛋白质。
