关于-80度冻存组织的核蛋白提取的问题

可以的，结果可能会不同，减少-80度的时间，结果应该会更相近一些

试剂盒提取-80的冻存样本是完全没问题的。只要是这个蛋白不过多的降解。不过一般都存在降解，存储时间不宜过长，提取时可以适当浓缩。

这种情况下最好进行厂家技术咨询。 其次，如果样品一直冻存于-80，样本形态完整，试剂盒不贵的话可以买个小的试试是否能提出蛋白

提取的蛋白产物用WB鉴定分离可能会得到很多污染条带，需小心分离。若对于产物纯度有较高要求还是建议使用新鲜样品进行提取。

因为试剂盒是生厂商针对新鲜组织开发的，所以在有条件的情况下当然是使用新鲜组织比较好。但是，如果只有冻存组织，那么可以根据冻存组织的状态有选择地使用，例如组织冻存比较完好，较少降解，细胞损伤较少则可以通过预实验尝试，根据预实验结果决定是否开展实验。

-80℃冻存的组织是可以做核质分离实验的，对结果基本上没有什么影响，如果不放心试剂盒，可以参考分子克隆指南手动进行核质分离。

我认为是可以的，负80度冻存的组织能够保存蛋白，结果相差不大

我觉得可以提取吧，影响应该不大，有专门提取冻存蛋白的试剂盒，不过最好还是用新鲜组织来提取啦

一般情况下没有问题，也不会有什么影响 但某些特殊的蛋白冻融后再提降解比较严重 或者性质变化很大 这时候就只能现收现纯了

可以的，结果可能会不同，减少-80度的时间，结果应该会更相近一些。

影像应该不大，保持低温操作，可以不用加蛋白酶解抑制剂。

结果会不准确，，不管新鲜还是冷冻都可以分离组织的胞质胞核，组织分离胞质胞核的关键是研磨，研磨的目的是组织分离成单细胞，这样后续才可以均一化如细胞样品一样进行胞质胞核分离。

一开始，我感觉是不可以的因为冻存的组织，拿出来以后，基本上细胞的结构就遭到破环了，但是检索一下文献后发现---新格元（南京）生物科技有限公司 南京通元医学检验实验室有限公司 申请的专利：适用于冷冻组织的单细胞核提取方法---提到一种 NEBCS核分离液可以从冷冻组织中提取到完整的细胞核，然后再按照别的kit里面破核膜的方法，就可以提取he蛋白了。 NEBCS核分离液的组成成分包含有0.32M蔗糖，5mMCaCl2，3mMMg(Ac)2，0.1mMEDTA，20mMTris-HCl，0.05%~0.08%TritonX-100，5mM~8mMDTT，0.2U/μLRNaseinhibitor。 附上：检索到的专利的网页：https://cprs.patentstar.com.cn/Search/Detail?ANE=AHIA9HFD9GHG1AAA9EHD8EEADHFA9EBB9DBA9GFE9FCH9CCD

-80提取核蛋白理论是可以的 因为那个时候蛋白质能维持一定活性。另外也需要看自己的实验目的。

若对于产物纯度要求不高可以使用，但是冷冻保存的样品提取出的核蛋白会减少，而且冻融操作可能会使细胞膜过早破裂，使细胞质成分污染提取的核蛋白样品，造成产物纯度下降。提取的蛋白产物用WB鉴定分离可能会得到很多污染条带，需小心分离。若对于产物纯度有较高要求还是建议使用新鲜样品进行提取。

可以，因为-80冰箱是可以保护新鲜组织核蛋白的，而且文献报道了这种方法，说明可靠，我会购买和文献统一的试剂盒进行实验，咨询好技术是否不合适使用于自己的实验

可以做 我试过。蛋白会稍微有些降解 因为核蛋白本来就少 所以尽量用新鲜的

核蛋白提取试剂盒通常是分步裂解离心获得细胞核然后破碎获得核蛋白，所以保持细胞核结构的完整很重要。-80冻存的细胞结构可能破坏很大，应该仍能提取到一部分仍然完整的细胞核和核蛋白，但结果未必能代表整个样品

看你提核蛋白的用途，若是定性分析，使用你所提及thermo 公司的kit可以办得到。 冻存组织一般解冻会给样本带来不可逆损伤。细胞破裂会影响kit使用(cytoplsm 提取可能会有较大干扰)。但是只关注核蛋白可能会出现提取量不够的情况，一般不会出现无法提取到，但是这不是绝对情况。 那款kit使用效果比较好，最近一直在使用，按照protocol增加buffer I 的比例会更有帮助。

可以用冻存样本提取试剂盒（某厂家），提取过程简便，可在一小时完成，制备的核蛋白纯度高，较少交叉污染。