为什么我的细胞提取液中没有目标蛋白？或者提出了很多杂蛋白

分子量太大了，表达不出来；也有可能同时有细胞毒性。

1.你的重组蛋白分子量=27KD+130KD=157KD

2.原核蛋白表达的分子量大小一般不能超过100KD(含标签)；如果不表达，诱导剂浓度，温度，时间的调整方面，意义不大，不会实现从无到有的质变，只是个量变而已。

3.如何解决：

A.大蛋白很少使用大标签，

B.截断表达

C.更换为真核表达系统

D.做实验之前先预研一下：文献和商业化蛋白的厂家，做个参考。

可能是被酶降解，可能是没有保持低温操作，样品保存不当，样品放置时间过长。

1 你的细胞中不表达这种蛋白质，换一种细胞；2 你的细胞中的蛋白质被降解掉了，你必需加入PMST，抑制蛋白酶活性；3 你的抗体不能识别目标蛋白，多看看说明，看是否有问题。

载体没问题，那目的基因有没有插入进去呢？有可能是自连的空载呢。