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WB怎么做才是杂志要求的原始条带?

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yanlai000

现在大部分杂志都要求不能裁膜,那应该怎么做?方案A:转膜后孵内参一抗,TBST洗,继续孵目的蛋白一抗,TBST洗,孵育二抗,一起曝光显影?

方案B:孵一抗,孵二抗,曝光显影,剥离缓冲液处理,重新孵另一个一抗,孵二抗,曝光显影?

方案C: 正常裁膜,分别孵一抗、二抗,曝光显影时同时拍摄白光和曝光图,然后overlap,这样marker也可以看到?

方案D?

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5 个回答

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麻黄连翘赤小豆

有帮助

蛋白分子相近的一抗最好不要放一起混,后面说不清,距离远的可以。如果只能相近的就把内参跑完,洗掉一抗然后重新孵育那个一抗。主要还是看杂志要求,不能裁膜只是相对的,看你的抗体蛋白分子量

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bamboopiggy

有帮助

你的选项的C 是可以的,一定要保留原始数据,切膜一定要带至少一个条marker。不建议多次洗脱,重新孵育抗体

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balalaLy

有帮助

先孵目的蛋白,洗脱后再孵内参。不建议抗体混合后孵育,因为不能确保所有抗体每次都是只有一条特异性条带。

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whilt-shirt

有帮助

先正常封闭敷一抗二抗,然后开始洗脱,重新封闭敷下一个一抗二抗

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Eason老歌迷

有帮助

转膜后整张膜,孵一抗,一抗可以混一起,然后洗膜,孵育二抗,然后洗膜,然后曝光。

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