dxy_zb3k48t2
诱导时间一组6小小时,另一组18小时,IPTG浓度梯度0.1mM,0.5mM,1.0mM。脱脂奶粉室温封闭2小时,一抗4度过夜,TBST洗4遍每次10min。二抗室温1.5小时TBST四遍每次10min。
抗体工
第一建议Wb再重新做一下,弄个清晰的条带,方便确定蛋白是否表达。其次80多kd蛋白已经有点稍微大了,如果不表达,建议考虑真核系统
dxy_dw9ax5p4
应该是转膜条件的问题,因为WB条带有的都不清晰。另外一个你WB为什么这么多条带,抗体用的什么?
bamboopiggy
感觉你蛋白诱导虽然能出来,大概在90kd左右,但是没有随时间的延长和iptg浓度的升高而表达量升高。可能你还需要优化条件,至于wb,感觉是因为你蛋白表达的量少,或者是抗体不特异,所以背景全部都出来了。显得特别的脏
Eason老歌迷
感觉你第一个图挺好,条带还有。第二个的话,有大的圆形气泡,是不是你的转膜没转好,然后背景也比较脏。
whilt-shirt
WB条带有可能是封闭不彻底导致的