救救，WB苦手又来了，几乎所有条带都这样，没有蛋白，背景脏~

背景脏不一定是因为仪器不干净造成的，也有可能是蛋白降解或者整个实验过程中条件不合适造成的。

WB背景高可能的原因及建议：

①膜封闭不够，建议延长封闭的时间；选择合适的封闭液。

②一抗稀释度不适宜，太高，选择最适宜的抗体稀释度。

③ 一抗孵育的温度偏高，建议4℃过夜孵育。

④选择的膜容易产生高背景，一般NC膜的背景会比PVDF膜低，但是NC膜吸附力也就差了一点。

⑤膜在整个实验过程中干过或手套反复接触过，实验过程中要注意保持膜的湿润，使用镊子夹取膜。

⑥检测时曝光时间过长，可减少曝光时间。

一个月蛋白降解不会那么夸张连一点蛋白都没有，应该是转膜的问题，条带上还有个很明显的空泡