665无
如果蛋白可以耐一定的盐浓度,可以补加点盐试试
dxy_9elsat18
计祘目的蛋白的等电点,然后调整所用溶剂的pH
Eason老歌迷
蛋白如果浓缩过快或者过度浓缩都有可能引起蛋白沉淀,建议蛋白浓缩后的最终浓度不要超过20mg/ml。
如果已经出现沉淀,可以改进一下实验方法:
1、离心力降低为原来的20-50%,
2、改用截留分子量更大的超滤膜,
3、在浓缩过程中取出超滤管,用枪头反复
吹吸几次再继续浓缩,
4、体积较大的样品可考虑选用超滤杯,减
少沉淀的发生。
据我所知,没啥补救
一个小哭包
纯化过程中的沉淀可有以下原因:
1. 蛋白本身容易絮凝,如果是这样,可添加Tween-20减少具体产生。
2.pH靠近蛋白的等电点,可根据软件计算入VECTOR NTI计算其理论等电点,尽量纯化的溶剂在远离等电点。
3.蛋白浓度过大,调节纯化时蛋白的浓度即可,如果需要高浓度蛋白,用超滤或冷冻干燥浓缩即可。
4. 离子强度。
5. 温度,低温纯化,低温存放。
bamboopiggy
沉淀可以不要。下次试着延长一下裂解时间。
未来9
有少量沉淀不影响后续实验,因为蛋白沉淀可能是因为蛋白浓度过高,导致蛋白聚集,变性,或结构改变引起沉淀,而做WB前要加SDS上样缓冲液,并煮沸,目标是为了让蛋白彻底变性,SDS作为一种去污剂,也可以增加蛋白的溶解度,最后离心,会取溶解的部分去上样的。
而且如果加入loading以后,可能会发现,沉淀反而变少了,就是因为一部分沉淀的蛋白被溶解了。
相关产品推荐
相关问答