Eason老歌迷
一,切记蛋白质的储存标准:
超低温、分装、浓缩、冷冻/速融、添加剂。
二,如即提即用的话,可将浓缩蛋白质存储在单一溶液(如PBS),放置聚丙烯管或整洁的玻璃容器中,放到4°C冰箱储存。
分析到适合的缓冲溶液中能够冻干,放4°储存;也能加浓度较高的的硫酸铵(你的蛋白质不沉积的话),4°储存。
提纯后的蛋白质测浓度值后,添加50%凡士林,确定搅拌后分装,液态氮冷冻,放进-20度或-80度储存,特别是在适用抗氧化物。
有一些蛋白质能够不用凡士林,立即液态氮冷冻数分钟,-80度储存。
长期性储存蛋白质还可以用冻干。
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分装保存在-20或-80度,保存液中加入蛋白酶抑制剂。
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若只需要短期保存(1d至几日),蛋白质样品可以用缓冲液溶解后4℃储存。若要长期储存(超过1周),可采用以下几种方法:(1)在硫酸铵溶液中将蛋白沉淀以悬浮的形式置4℃保存;(2)硫酸铵沉淀蛋白后2000r/min离心20min,在液氮中冷冻后-80℃或更低的温度储存。
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保存蛋白质应该遵循下面这几个原则:
1. 低温
低温下保存蛋白质是极其必要的。低温意味着更低的能量,低温下蛋白质分子热运动较低,其内部的成键不容易断裂。另外,在低温下,微生物不容易生长,可能存在的蛋白酶的活性也会很低,这些更容易保证蛋白质的活性。
2. 分装
蛋白质有时候是需要冷冻保存的,但我们使用蛋白质时却是在室温或者更高的温度。冻融这一过程会对蛋白质造成不可逆的损伤。因此我们需要尽量减少冻融的次数。纯化后的蛋白质,进行分装保存,每次需要多少便融化多少,保证蛋白质样品只经历一次冻融。
3. 浓缩
纯化后的蛋白质尽量以高浓度保存,浓度最好在1mg/ml以上,高浓度更有利于蛋白质的稳定。高浓度的另一个好处是防止蛋白质分子黏贴在塑料或玻璃材质的管壁上。不要惊讶哟,疏水性蛋白质是很容易粘贴在管壁上的。
4. 速冻/速融
在蛋白质溶液冷冻的过程中,纯水首先结冰,蛋白质分子会被暴露在极高的盐浓度或pH下,这会破坏蛋白的活性。因此,需要尽可能缩短冷冻的过程。速冻可以在液氮中进行,也可以在干冰,乙醇和丙酮的混合物中进行。速冻后,蛋白质可以保存在-20度或-80度中。同样的道理,蛋白质融化的过程也要尽可能的快速,可以在温水中进行。
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