蛋白质提取的好办法

你试一试这两种方法:
第一种：
1）将细胞系放在冰上
2）去除上清，用pH7。4的冷磷酸盐缓冲液洗涤单层细胞两次
3）加入1ml2%TritonX溶液冰浴15min
4)刮下单层细胞，4度下10 000g 5min离心
5）溶液37度水浴 10min以分离水相和去污剂相，然后37度下2 000g离心5min
6)收集水相留作分析
7）用500ul冰冷的buffer C溶解去污剂相沉淀，冰浴2min后加温，在按步骤6再次离心
8）按步骤8再次抽提去污剂相，用buffer C将洗涤后的去污剂相稀释到初始体积
9）用等量的buffer A分别稀释水相与去污相，并进行免疫沉淀实验
试剂：
1）2%tritonX114:2%TritonX114、50mmol/L Tris HCl（pH7。5）、蛋白酶抑制剂
2）缓冲液A（含0。5mol/LNaCl的RIPA buffer)
3)buffer C
10mmol/L Tris HCl(pH7.5)
150mmol/L NaCl
5mmol/L EDTA(PH7.5)

第二种方法：
液氮研磨组织，组织100倍量预冷的缓冲液A（10mmol/L Tris-HCL,320nmol/L 蔗糖，PH7.4，临用前加1mM的PMSF）；离心，每次10S×2，间隔20S，强度50，700g（4900rps），4度，10分钟。取上清，将此上清，37000g（18100rps），4度，40分钟，弃上清，取沉淀。用缓冲液B（A去掉蔗糖PH7.，临用前加1mM的PMSF）重新混悬。