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科研学霸天团，48小时有问必答

问氰基柱在反向系统时有什么注意事项

细水长流NAPI

1.避免中等极性溶剂，不可保存在这类溶剂中2.流动性平衡要足够时长3.氰基柱相切换使用下，要充分过渡

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问细胞培养液中蛋白富集方法

loveliufudan

分泌型蛋白的富集和沉淀方法有很多种，具体选择要根据您的实验需求和目标蛋白的特性来确定。以下是一种通用的筛选和富集分泌型蛋白的方法，供您参考：收集细胞培养液：当细胞生长至合适的密度时，收集培养液。您可能需要在收集前移除浮游细胞或细胞碎片。为此，可以将培养液通过低速离心（例如1,000-2,000 xg，10分钟）来实现。培养液的过滤：为了去除残留的细胞和细胞碎片，可以将收集的培养液通过0.22或0.

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问cutoff值是否与限制性立方样条中HR＝1的点等同?

毛利小五郎的徒弟

不是同一个，cutoff更倾向于比较特异性和敏感度。

2 回答47 围观

问wb中电泳上样时loading buffer和sample buffer 的区别

asswei

samplebuffer指的是双向电泳样品缓冲液，样品的特征：复杂，含盐或其他污染物，易被蛋白酶降解，动态范围宽（>X106），溶解性不均一（疏水性/亲水性），分子量、等电点的范围宽（10-500KDa，pH2-14）。loaderbuffer指的是上样缓冲液，也就是样品中加的缓冲液，是一种用于DNA电泳试验的缓冲液。因此两者不一样。

3 回答146 围观

问盐浓度、pH对BCA蛋白浓度检测影响大么

asswei

根据BCA法原理，将copper（Ⅱ）离子还原为copper（Ⅰ）离子需要正确的pH值。同时，样品的pH值也会影响反应的效率。

3 回答125 围观

问UBA6可以作为FAT10的底物吗？

asswei

UBA6与FAT10能形成异肽键，可以与FAT10会形成类似泛素的链。

3 回答72 围观

问蛋白表达咨询

loveliufudan

可能的原因有很多。可能是DNA转化效率不稳定，或者蛋白表达和折叠过程中存在问题，也可能是您的操作问题。以下是一些可能的原因和解决方案：1.转化效率不稳定：在您的实验中，37摄氏度生长可能会影响BL21(DE3)的转化效率。转化后，应该在室温下快速混合细胞和LB培养基，恢复期一般为1-2小时。然后将细胞在LB/ampicillin板上培养过夜。您可以考虑增加培养时间，以获得更好的转化效率。2.蛋白表

2 回答104 围观

问WB转膜部分失败，一个夹子里的有的就成功了，有的就失败了，求各位大佬指点

balalaLy

一个夹子尽量只转一张长8cm，宽4cm的膜，太大的话边缘容易转不上，另外转膜的时候尽量不要把胶裁开，夹夹子的时候容易使膜移位。

3 回答137 围观

问琼脂糖凝胶电泳

橙汁儿青柠味

主要是引物设计的不够特异，所以pcr出来很多非特异性的条带。可以在设计好引物后，在ncbi上面blast验证一下

4 回答107 围观

问请问怎么从细胞培养基中提取分泌蛋白呢？

橙汁儿青柠味

分泌蛋白存在于培养基中，首先可以减少培养基，从而增加蛋白浓度，如果蛋白量还是不够，可以将蛋白用真空干燥机进行浓缩冻干，然后再进行适当溶解即可。

2 回答142 围观

问我想请问一下如何寻找某一种糖基化修饰相关的糖基因或者酶基因呢？我前期通过实验发现某个抗体阳性的患者中，其贝塔-N-乙酰氨基葡糖胺

loveliufudan

2 回答46 围观

问为什么？小鼠皮肤组织蛋白

橙汁儿青柠味

首先确定蛋白浓度以及上样量足够，其次确定抗体种属正确。

1 回答71 围观

问成骨诱导救救孩子吧

loveliufudan

没有染色前的钙化结节可能难以观察到，因为钙化通常是细胞死亡或坏死的结果，会在钙离子等离子体中沉积形成。在组织切片或细胞培养中，未染色的钙化结节通常呈现为无色或白色颗粒或斑点，大小和形状不一。如果您在组织切片或细胞培养中观察到了这些颗粒或斑点，可以结合组织形态学和细胞学特征，如细胞形态、细胞核大小和形态等，来判断它们是钙化结节还是其他类型的结构，如死细胞团块。同时，钙化结节通常需要通过特殊的染色方法

2 回答58 围观

问【求助】ELISA检测STC-1细胞上清中激素实验问题

loveliufudan

ELISA检测吸光度过低可能有多种原因，其中包括蛋白质降解、稀释过高、实验操作不当等。考虑到您检测的是细胞上清中GLP-1、CCK、PYY等蛋白质，蛋白质降解可能是一个可能的原因。如果您怀疑蛋白质降解可能影响ELISA检测结果，可以考虑加入蛋白酶抑制剂来保护蛋白质。蛋白酶抑制剂可以避免蛋白质在细胞上清中被降解，提高样品中蛋白质的浓度和稳定性。另外，您也可以考虑调整实验条件，如缩短采样时间、降低稀释

3 回答79 围观

问关于IFN-γ和TNF-α诱导特应性皮炎炎症细胞模型的问题。

毛利小五郎的徒弟

加入这两种物质是诱导凋亡的，所以你后续的浓度摸索是对的，可以采用后面的浓度梯度进行实验。

1 回答72 围观

问使用PLA检测蛋白质互作时需要对细胞进行通透处理吗？

dxy_hz5yb7o9

经过 4% 多聚甲醛固定后，可以使用0.2% TritonX-100透化。

3 回答112 围观

问请问动物实验中哪些抗氧化指标比较新？

loveliufudan

以下是一些比较新的指标：NRF2（核因子E2-相关因子2）：NRF2是一个关键的转录因子，能够促进细胞的抗氧化防御反应。在小鼠灌服实验中，可以通过检测NRF2水平来评估细胞抗氧化能力。HO-1（血红素氧合酶1）：HO-1是一个抗氧化酶，在细胞应激反应中起着重要的作用。HO-1的表达水平可以反映细胞的氧化应激状态。GPX4（谷胱甘肽过氧化物酶4）：GPX4是一种细胞内重要的抗氧化酶，能够清除细胞内的

2 回答103 围观

问请教一下普通WB做泛素化条带应该怎么设计实验呢

loveliufudan

如果您想检测p53的泛素化，可以将细胞或组织样品进行裂解，然后用p53抗体进行免疫共沉淀（IP），将泛素化的p53捕获下来，最后通过WB检测泛素化的产物。具体实验步骤如下：细胞或组织样品的裂解：将培养细胞或组织样品加入裂解缓冲液中，加入蛋白酶抑制剂，离心裂解液去除细胞碎片和细胞核。免疫共沉淀：将裂解液加入p53抗体预先吸附的蛋白A/G琼脂糖糖珠中，免疫共沉淀泛素化的p53蛋白。如果您的样品中p53

3 回答150 围观

问loading buffer连到一起呈锯齿状，上样量20ul,请问为什么会出现这种情况？

loveliufudan

很可能是loading buffer 没有完全溶解或没有彻底混合。可以首先尝试充分混合和完全溶解 loading buffer。

3 回答84 围观

问Elisa的结果只拍照可以吗？

汤姆卜丽波

一般来说ELisa不要求原始数据，应该没问题

3 回答109 围观

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