提rna急急急求助。救命

有没有可能是细胞量实在是太少，再加上乙醇浓度不够，所以才这样，试试提高细胞量，用10cm的培养皿看看

对于贴壁细胞的RNA提取，可以不必用细胞刮的，我是弃除旧培养基后，用预冷PBS清洗2-3次，然后倾斜培养瓶吸净PBS，加1ml Trizol后室温静置5min（中途轻轻左右晃匀2-3次，使裂解液充分与细胞接触）。然后收集Trizol裂解液，可以立即放入-80℃冰箱30-60min（有看到说速冻可以裂解更充分，但我没有比较过），然后解冻后加200ul氯仿，后续步骤同你的，另外75%无酶乙醇提前遇冷，可以清洗两次得到更纯的RNA。

以上步骤都在通风橱内操作，并全程注意无酶操作，所有使用的EP管、枪头都需要无酶，配75%乙醇也用DEPC水或无酶水。希望能对你有帮助。

没有得到明显的RNA沉淀可能原因如下:

1. 细胞数量太少,一个T25 flask的80%密度可能细胞数不足,导致RNA回收量低。可以考虑扩大细胞培养规模。

2. Trizol量太少,1ml可能不够彻底裂解细胞。可以适当增加Trizol量,一般推荐1ml Trizol裂解5-10百万个动物细胞。

3. 分离步骤操作不当,将样本充分混匀颠倒是关键。可以加大振荡强度和次数。

4. 离心的参数不佳,可以提高离心速率到18000-20000rpm,延长离心时间。

5. RNA沉淀可能难以直接肉眼观察,尤其量少时。可以尝试将沉淀液移到1.5ml tube中离心观察。

6. 75%乙醇洗涤时注意不要丢失RNA沉淀。

7. 可以在提取缓冲液中加入葡萄糖提高RNA产量。

8. 也可以试试其他RNA提取试剂如TRIzol LS。

用70%的乙醇进行清洗，进行高速离心提取。

前面提取的RNA经异丙醇沉淀后，总会含有一些未除去的蛋白和其它杂质分子，这些蛋白和杂质分子如果不除尽的话，就会直接影响所提取的RNA的纯度和稳定性。为此，就需要用70%乙醇洗涤沉淀(因为在70%乙醇里RNA是不溶的,而一些蛋白和其它杂质分子却可溶),并且最好是洗涤2次，然后高速离心后，倒去上清，即可得到较纯的RNA沉淀。用无水乙醇则达不到这个目的