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可以大概看下转染效率,但是推荐更具有信服力的检测方法:
1. PCR检测mRNA水平的沉默效果,一般推荐在48h到72h检测,48h比较理想,需要具体的摸索时间。PCR检测沉默效果时,在设计引物的时候最好是将引物设计在沉默位点的两侧,而不是在同侧。这个是由于RNAi引起的沉默是先进行mRNA的切割之后造成mRNA的降解。另外,即使设计在两侧,也不要离沉默位点太远的地方,不然可能会造成对沉默效果的低估。
2. WB检测蛋白蛋白水平的检测,一般在转染后48h到92h间提蛋白检测蛋白水平的沉默效果,检测时间跟你的蛋白的半衰期有关系,具体的时间需要设计时间梯度,一般理想的是在72h最明显。
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可以但不推荐。以荧光信号的强弱判断 siRNA 转染效果并不准确,最好采用荧光定量 PCR 来判断转染效果。因为 siRNA 转染成功最客观的标志就是基因表达量的减少,另外,细胞本身会吸附荧光染料,会出现非特异性吸附。
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