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丁香通

【求助】提组织RNA时,为何OD值总是小于1.8

相关实验:RNA 干扰技术

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大彬大彬

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6 个回答

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迟C迟

有帮助

RNA 260/280<1.8说明有蛋白质、酚的污染。

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丁香粉猪猪

有帮助

1,有污染,从新提取,从各方面注意。

2 我以前也遇到过比值很低的情况,其实是我们的仪器不太准,如果这样的话,低了也能用

可能有以下原因:

1.匀浆时,样本太多,而抽提液使用量太小

2.匀浆后,样本没有静置

3.水相中可能有酚残留

4.RNA沉淀溶解不充分

5.测比值时,RNA溶解在DEPC水中,低的离子浓度和PH值增加了280nm的吸光值

用TE稀释,用TE调0

谢谢各位的指点。

会不会是TRIZOL的问题了?

组织能否完全研磨成匀浆是否也与比值有关?我的组织较硬,研杵研不碎,剪刀也不能完全剪成匀浆,所以每次总有一些微小的块状物。这是否会影响所提取RNA的质量了?

当然会有影响了,没有完全研磨成粉末状,与trizol反应时怎么能接触完全呢?必然导致块状物里的RNAse起作用。还是用液氮吧,我以前做的是海参的肌腱,不光硬而且还很韧,但是用液氮一冻就变得特别脆,用研钵可以完全研磨成粉末状了,趁液氮还没挥发完毕就转移到trizol里取得了很好的质量。

把异丙醇加大用量,再用乙醇多洗几次再看看。组织中RNA的量是多但是杂质也多。你可以试试!我们试过了很管用。

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bamboopiggy

有帮助

如果260/280小于1.8是蛋白质污染了,以后吸上面的液体时,离中间的小白片远点。260/230小于1.8,是有机溶剂污染,你酒精没有晾干,再多晾一会。

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未来9

有帮助

可能有以下原因:
1.匀浆时,样本太多,而抽提液使用量太小
2.匀浆后,样本没有静置
3.水相中可能有酚残留
4.RNA沉淀溶解不充分
5.测比值时,RNA溶解在DEPC水中,低的离子浓度和PH值增加了280nm的吸光值

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府宅

有帮助

一般来讲如果使用DEPC处理水会使OD值小于1.8,可以换TE缓冲液。

如果使用TE缓冲液效果没有改善,有可能是有蛋白的污染。

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天一湖医者

有帮助

od值比较不仅与降解有关,也与RNA纯度有关,一般值比较低,说明不纯,有蛋白质污染,较高,则可能是有降解;另用DEPC水溶解也能使od值偏低

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