府宅
1.避免RNA酶污染:微量的RNA酶将导致RNA实验失败。由于实验环境中RNA酶普遍存在,如皮肤,头发,所有徒手接触过的物品或暴露在空气中的物品等,此保证实验每个步骤不受RNA酶污染非常重要。
2.健康的细胞转染效率较高。此外,较低的传代数能确保每次实验所用细胞的稳定性。为了优化实验,推荐用50代以下的转染细胞,否则细胞转染效率会随时间明显下降。
3.针对RNA制备方法以及靶细胞类型的不同,选择好的转染试剂和优化的操作对RNA实验的成功至关重要。
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加入多的酵母进行提取,或者分开几管进行提取后合成一个罐子进行溶解RNA,还有提取的方法,目前比较常用的,效果比较好的是酚氯仿提取法
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在转染前要确认RNA的大小和纯度。为得到高纯度的RNA,可以洗脱除去反应中多余的核苷酸,小的寡核苷酸,蛋白和盐离子。注意:化学合成的RNA通常需要跑胶电泳纯化(即PAGE胶纯化)。
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