如何提高转染率

oldhappy求助：我做的是脂质体法转染（lipfectermine 2000）骨髓间充质干细胞（c57小鼠），现在刚转的是第3代细胞，铺板都很好，细胞密度也很大，但是36-48h观察基本没有荧光，也应该是没有转上了，宁外我的重组质粒时间很长了，提取有2个多月了，是不是这也有很大关系，以前的转染还算成功的/转染量如下。

A2.0重组质粒+50 培养基 B1.5脂质体+50 培养基

A4.0重组质粒+50培养基 B2.0脂质体+50培养基 （单位均为微升）

希望各位战友给点意见，不胜感激！！谢谢

丁香园网友qxlbljys认为：1.重提质粒，必要的话对质粒重新进行鉴定比如酶切等

2.注意观察细胞状态，如果细胞状态允许可适当延长转染时间

丁香园网友libingtianya认为：酶切鉴定