RNA提取相关的问题

提取之前要先在hood里喷rna酶清除剂，将hood擦干净，然后使用的移液枪也要喷rna酶清除剂，擦干净。最好紫外照个15min。然后使用无rna酶的枪尖。进行提取。将4度离心机，也喷rna酶清除剂，擦一下。实验开始前，穿实验服戴口罩，从酚氯仿抽提开始，加入异丙醇后的rna就要冰上放置。每一步操作完都放冰上。如果想的到相对多的rna，异丙醇沉淀的步骤可以-80过夜。

　　1.RNA在细胞内极易降解，样本选择时一定要选取新鲜的样本组织或者取样后迅速低温处理（液氮速冻）；样本出现多次反复冻融后，RNA得率会严重下降，也会导致RNA降解；RNA提取环境要保持无RNA酶污染；

　　2.RNA容易受到环境污染导致RNA严重降解，建议实验过程中注意更换实验手套，使用所有耗材应该均无RNA酶的一次性耗材；

（1）裂解液的量不足，使得裂解不充分

现有的RNA提取试剂，都含有快速抑制RNA酶的成分。在培养细胞中加入裂解液，简单的振荡，即可使所有的细胞与裂解液充分混匀，细胞被彻底裂解。细胞被裂解后，裂解液中的有效成分立即抑制住细胞内的RNA酶，所以RNA得以保持完整。

（2）高温提取

提取RNA需要偏酸、低温、让RNA酶失活的环境；

（3）实验器材

首先应当保证整个实验在超净工作台中完成。

提取过程中配制溶液用的水是否除酶，枪头，离心管是否无酶。这些都是引起RNA降解的原因。注意使用无酶耗材（可购买或使用DEPC Water处理后灭菌），单纯的高压灭菌不足以去除RNA酶。（4）实验人员

实际操作过程中，手套是最容易污染样品的，因此手套要勤换。

实验操作人员说话过程中所带的唾液也会携带RNA酶，会导致样品的降解，故需戴口罩操作。

实验人员熟练快速地完成整改RNA的提取，减少实验所用的时间，也可有效减少外源性RNA酶污染的几率。

1、所用试剂、耗材需用DEPC水浸泡然后高压灭菌

2、实验时戴口罩，主要是防止呼吸、说话时RNA酶进入试剂中

3、实验台保持清洁、降低环境RNA酶

4、RNA提取后，放入-80摄氏度保存，防止降解