多重实时荧光PCR方法学建立，需要什么性能验证

灵敏度，准确度，线性范围，最低检测线

1.一种多重荧光定量PCR的方法，其特征在于，所述方法包括：

将多个目标片段的扩增引物对置于同一扩增体系中进行PCR扩增，所述PCR扩增包括N轮PCR热循环，10≤N≤50；

每一轮PCR热循环后，对PCR产物进行程序升温，获得所述多个目标片段形成的混合片段的熔解曲线；

根据所述混合片段的熔解曲线，计算所述每一轮PCR热循环后各单一目标片段的含量，进而建立各单一目标片段的含量随PCR热循环次数增加而变化的扩增曲线

各对引物对目的片段检测的灵敏度和特异性，引物混合后对目的片段检测的灵敏度和特异性。检测稳定性，批间，批内，日间，日内

可以通过梯度稀释的WHO标准品制作标准曲线,然后用该试剂盒检测2例临床血清标本以建立靶值,接着用自建系统检测,比较此款试剂盒的性能