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qPCR | Undetermined

相关实验:PCR 产物的 TA 克隆

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陌上花开1586

荧光定量PCR 三步法

RNA已经标齐到1μg/μl

逆转录之后20μl体系稀释到60μl

为什么Undetermined和低CT值同时出现了?

应该降低模板浓度吗?难道是降解了?

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3 个回答

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z流沙z

有帮助

部分目的基因表达量低,就没有测出来,这些基因就不适合稀释

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毛利小五郎的徒弟

有帮助

考虑是存在降解,不建议降低模版浓度,可以重新来一遍试一下

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loveliufudan

有帮助

Undetermined和低CT值同时出现可能有多种原因,下面列出几个可能的原因:

模板浓度过高。当模板浓度过高时,荧光信号会饱和,超过荧光仪的检测范围,导致CT值无法计算,同时也会导致低CT值的出现。

质量差的RNA。如果RNA质量不好,可能会导致部分反应无法进行或引起不良反应。

退火温度或时间不合适。不同引物的最佳退火温度不同,如果温度太高或时间太长,可能会导致非特异性扩增。

针对以上情况,建议进行以下操作:

调整模板浓度。如果荧光信号饱和,可以尝试将模板浓度适当稀释,再进行PCR扩增。

检查RNA质量。使用质量好的RNA可提高反应的可靠性和准确性。

优化PCR反应条件。尝试调整退火温度和时间,选择最适合的PCR条件。

另外,如果出现Undetermined和低CT值,可以考虑进行再次检测,同时可以进行重复实验来验证结果的准确性。

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