qpcr溶解曲线双峰

可能原因有以下几点:

1.样品有gDNA污染

2.引物不够特异

3.引物二聚体

建议先跑琼脂糖电泳，看条带亮度和是否单一，之后再跑定量

qPCR溶解曲线出现双峰多数是因为引物不佳，尤其是同批次实验中其他基因正常，只有某些基因出现双溶解峰。建议重新设计并合成该基因的引物

有可能是引物问题，建议重新设计引物

如果有的样本是单峰，有的样本是双峰，你注意一下双峰样本的rna 260/230和260/280的值。

双峰可能是引物的问题，或者是样本不纯导致，多跑几次看看峰会不会消掉，能消掉说明不是引物问题，有时候就是要多跑一次

引物设计不够优化

--与阴性对照的熔解曲线比对可判断是引物二聚体或是非特异性扩增的影响。相应的调整引物设计，避免引物二聚体、发夹结构或非特异性扩增的出现。

引物浓度不佳

--适当降低引物的浓度（200-250 nM为宜），并注意上下游引物的浓度配比

镁离子浓度过高

--适当降低镁离子浓度，或选择更合适的预混试剂盒。

模板有基因组的污染

--适当降低镁离子浓度，或选择更合适的预混试剂盒。