QPCR实验平行孔Ct值差别太大是什么原因？要怎样进行调整？平行孔之间Ct值要保证偏差在多少之间才可以，有标准么？

一般是加样操作问题，可以通过多加几个复孔排除掉异常孔数值来解决。

Ct值平行孔差距大，最简单直观的原因是加样不准确，如果不能排除是否是加样的问题，建议从加样改起，把实验的体系加大，排除枪头损失造成的加样误差。

1.RNA的质量要好。2，上样的枪尖要和枪match，3.同一个样品，用用一根白枪尖上样。

Ct值得偏差在0.5以内是可以容忍得。

ct值差别大，可能是模板浓度低或存在PCR抑制物，或者是你的pcr扩增效率低。Ct值的范围为15-35。Ct值小于15，认为扩增在基线期范围内，未达到荧光阈值。理想情况下，Ct值与模板起始拷贝数的对数存在线性关系，也就是标准曲线。通过标准曲线，扩增效率为100%时，计算出基因单个拷贝数定量的Ct值在35左右，若大于35，理论上模板起始拷贝数小于1，可认为无意义。

上样操作误差，比如样品没有完全打下去还残留在枪头里。误差不大于0.5